התחל על ידי כריתת לפחות 20 אשכים מן הגלמים של יתושי אנופלס PBS סטרילי. מעבירים את האשכים לשקופית מיקרוסקופ נקייה המכילה טיפה טרייה של PBS. בעזרת קצוות מסוננים P1000 או קצה של מחט דיסקציה, מעבירים את האשכים לצלחת עוברית המכילה 3.7% פורמלדהיד ב-PBST.
יש לדגור במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, לשטוף את האשכים PBST במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. מעבירים את האשכים לצלחת העובר המכילה RNase A ומודגרים במשך חצי שעה ב 37 מעלות צלזיוס.
הסר את תמיסת ה- RNA והוסף מיליליטר אחד של התמיסה החודרת. לדגור את האשכים בתמיסה חודרת בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. לאחר מכן לשטוף את האשכים PBST פעמיים במשך חמש דקות כל אחד.
מעבירים את האשכים לצינור של 1.5 מיליליטר המכיל 20 עד 30 מיקרוליטר של תמיסת הכלאה עם בדיקת ה- DNA המסומנת. דוגרים על התערובת למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בחושך כדי לאפשר הכלאה. בעזרת AP 1000 קצה מסונן לבן משעמם, להעביר את האשכים לתוך צלחת עובר, ולאחר מכן לשטוף אותם בשני XSSC במשך חמש דקות.
הסר את ה- SSC ולאחר מכן הרכיב את האשכים על שקופית זכוכית חלבית באמצעות אמצעי הרכבה זמין מסחרית המכיל DAPI. אטמו את המגלשה בחומר איטום להחלקה ודגרו עליה בטמפרטורת החדר בחושך למשך שעתיים. רמה טובה של הכלאה אפשרה הדמיה של הכרומוזומים הממוקדים לאורך כל הזרע.
ניתן היה לראות את הזיווג של כרומוזומי המין המסומנים בשלבים הפרה-ביוטיים והמיוטים. ניתן לעקוב אחר זרעונים נושאי X או Y לאורך ספרמיוגנזה המסומנת על ידי רמות שונות של עיבוי DNA עד לשלב הסופי של זרעונים בוגרים בצורת חץ.
