Mounting the Mouse on the Live Imaging Insert for Intravital Imaging

לפני הנחת העכבר המורדם על עלון ההדמיה החיה המותקן על שלב המיקרוסקופ ההפוך, יש להשחיל את צינור האיזופלורן עם חרוט האף המחובר דרך תושבת הצינור הפינתי שעל העלון. לאחר חיבור פלטת החום לבקר המכיל בדיקת מדחום אנאלי מחובר והפעלתו, העבירו את העכבר המרדים מתא האינדוקציה אל לוחית החום. לאחר מכן הצמידו את חרוט האף לעכבר.

הכנס את הבדיקה האנאלית לתוך החיה וכוונן את הבקר כדי לשמור על טמפרטורת גוף יציבה של כ 36 מעלות צלזיוס. כסה את העכבר הממוקם כראוי בניילון נצמד כדי ללכוד את חום הגוף ולהעלות את טמפרטורת הגוף. מקם את העכבר כך שראשו יתיישר עם דיסק הכיסוי והכנס את אוזנו למרכז החלקת כיסוי הזכוכית באמצעות אטב אוזניים מתכתי או סרט הדבקה.

לאחר השלמת ההדמיה, בחר באפשרות זרימה נמוכה בוופורייזר האלקטרוני כדי להפסיק את אספקת האיזופלורן. העבר את העכבר לכרית חימום עד שהוא הופך אמבולטורי. לאחר הסרת דיסק הכיסוי, נגב אותו עם נייר עדשה ותמיסת עדשה.

אחסנו אותו כראוי כדי למנוע שריטות לשימוש חוזר. לאחר מכן, נתקו את צינורית ההרדמה מתושבת ההחדרה ופתחו את הברגת האינסרט משלב המיקרוסקופ. ערימות Z שנרכשו של רקמת אוזן עכבר חי עם תווית ניאון פלורסנטית הראו סחף מינימלי בצירי x, y ו- z לאורך זמן, ואימתו את תוספות ההדמיה החיה המודפסות בתלת-ממד בהתאמה אישית.

נקודות הזמן מסרט בהילוך מהיר בן שלוש שעות של תאי אפידרמיס האוזן של עכבר זכר בוגר חשפו מישור z יחיד שנותר בפוקוס לאורך הזמן הממושך. תצפיות דומות נערכו מסרט נוסף בן שלוש שעות של פיברובלסטים עוריים חיוביים לאוזן GFP של עכברה בוגרת.