התחל על ידי מיקום עכבר מסומת חסד עבור enucleation העין באמצעות מלקחיים מעוקלים כדי ללחוץ על הרקמה סביב העין כדי להזיז את העין מחוץ לשקע. לאחר מכן הרימו והסירו את העין, והעבירו אותה ל-PBS טרי במגש הנתיחה. בעזרת מספריים עדינים במיוחד, חותכים את עצב הראייה קרוב ככל האפשר לגלגל העין, ומחדירים בזהירות פינצטה ישרה בקצה הדק לתוך גלגל העין דרך יציאת עצב הראייה בחלק האחורי של העין.
כעת, מכניסים מספריים בחלק האחורי של העין ומתחילים לבצע חתך מהאחורי לכיוון צומת סקלרלי הקרנית, וממשיכים את החתך עד להפרדת חצי הצומת. דחפו בעדינות את הקרנית כך שהעדשה תוכל לצאת דרך החתך. בעזרת פינצטה ישרה בעלת קצה דק, הסירו בזהירות חתיכות גדולות של רקמה מהעדשה.
לאחר מציאת האזור המשווני, ניקב את העדשה באופן רדוד ולאחר מכן הסר את קפסולת העדשה. מעבירים את תאי סיבי העדשה לצלחת של 60 מ"מ עם 1% פרפורמלדהיד. באמצעות אזמל חד, לפצל את הכדור של תאי הסיבים לשניים לאורך הציר האחורי הקדמי שלה.
ואז עוד לחתוך את החצאים לאורך אותו ציר כדי לייצר רבעים. השתמש בפינצטה הישרה כדי להסיר את אזור הגרעין מרבע תא סיבי העדשה. לאחר מכן, להוסיף 200 מיקרוליטר של 1% paraformaldehyde צלחת 48 באר.
מעבירים את קליפת העדשה לצלחת ודגרים במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר עם ניעור עדין ב-300 סל"ד. לאחר החסימה, יש להוסיף נוגדנים ראשוניים מתאימים לצלחת 48 הקידוחים ולהעביר דגימות לתמיסת הנוגדנים הראשונית. לדגור על הדגימות במשך הלילה ב 4 מעלות צלזיוס עם רעד עדין או מוטציה.
למחרת, לשטוף את הדגימות עם PTX, ובאופן דומה, לדגור אותם עם נוגדנים משניים. לאחר שטיפת הדגימות, יש להוסיף טיפה אחת או 50 מיקרוליטר של אמצעי הרכבה על שקופית מיקרוסקופ טעונה פלוס. הניחו את הרקמה באמצעי ההרכבה.
והשתמשו בפינצטה כדי להפריד בעדינות את תאי הסיבים זה מזה. לאחר מכן, הניחו בעדינות את החלקת הכיסוי על גבי התאים המופרדים ואמצעי ההרכבה. לאחר הסרת עודפי מדיה, יש להשתמש בלק כדי לאטום את קצוות החלקת הכיסוי על המגלשה לפני מיקרוסקופ קונפוקלי.
לאחר דיסקציה של העדשה והסרת כמוסת העדשה, העבירו את מסת תא הסיב לקצות האצבעות הכפפות הרטובות וגלגלו בעדינות לכל הכיוונים כדי להפריד את גרעין העדשה. לאחר מכן, העבירו את גרעין העדשה לתמיסת 1% פרפורמלדהיד טרייה בצלחת של 48 בארות ודגרו למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם טלטול עדין או מוטציה. למחרת, העבירו את הדגימה לצלחת 60 מ"מ עם 1% פרפורמלדהיד והשתמשו באזמל חד כדי לפצל את גרעין העדשה לאורך הציר האחורי הקדמי לשניים, ואז לרבעים.
לאחר מכן, לאחר מכן, לאחר מכן, לחסום, להכתים ולהרכיב את הדגימה כפי שהודגם קודם לכן בתכשירים אלה, צרורות של תאי סיבי עדשה עם מורפולוגיות ייחודיות נמצאים מאזורי עדשה שונים. הצביעה של רשת F-actin מראה העשרה בקרום התא בסיבים מתמיינים ובשלים, בעוד אותות F-actin נמצאים בציטופלסמה של סיבי הגרעין. מיקרוסקופ אלקטרונים סורק ותמונות קונפוקליות של תאי סיבים מתמיינים מראות אינטרדיגיטציות של כדורים ושקעים עם בליטות משתלבות קטנות, בעוד שלסיבים בוגרים יש משוטים המעוטרים בבלטות קטנות.
סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים ותמונות מיקרוסקופ קונפוקלי של תאי סיבי עדשה גרעינית חושפות בליטות משתלבות נדירות וגדולות יותר בצדדים הקצרים של התאים שבהם קרום התא מחוספס ויש לו אינטרדיגיטציות לשון וחריץ בתאים אלה ממרכז העדשה.
