כדי להתחיל, להכין דילול לסרום של המטופל או דגימות נוזל השדרה המוחי לבדיקה. הכינו את הצמידות הנדרשת בריכוז העבודה המתאים על ידי דילול שלה ב-PBS עם 0.05% כחול אוונס. לבדיקות נוגדנים פלואורסצנטיות עקיפות, יש לאחזר את המספר המתאים של שקופיות אנטיגן מוכנות הדרושות לבדיקה.
אפשר לשקופיות להפשיר ולהתייבש לחלוטין. לאחר מכן, מניחים את המגלשות בצנצנת קופלין מלאה באצטון ומעבירים אותן למקפיא מינוס 20 מעלות צלזיוס המאושר לחומרים דליקים למשך שעתיים עד לילה. לאחר מכן, הסירו את המגלשות מהאצטון ואפשרו להן להתייבש באוויר.
כעת, מקם את המגלשות בקופסת תא הלחות בתוך ארון הבטיחות הביולוגית. כדי לשמור על הלחות, הוסיפו לתא רצועות סופגות ספוגות במים מזוקקים. החל 50 מיקרוליטר של כל דגימת ביקורת, דילול דגימה או PBS על הבאר שנקבעה מראש.
הניחו את תא מגלשת הלחות הסגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, אינקובטור לחות של 5% פחמן דו חמצני למשך 30 דקות. לאחר שתסיים, הסר את תא מגלשת הלחות מהאינקובטור והעבר אותו לארון בטיחות ביולוגית. בעזרת קצה שאיפה, שאפו בזהירות את הסופרנאטנט מכל באר מבלי להפריע לחד-שכבה של התא.
לאחר מכן, יש למרוח טיפה אחת של PBS על כל באר באמצעות פיפטה טפטפת סטרילית. שאפו בזהירות את PBS והעבירו כל שקופית לצנצנת קופלין מלאה ב-PBS. לאחר מכן, החזירו את המגלשות לקופסת תא הלחות.
החל 50 מיקרוליטר של נוגדן אנטי אנושי מתאים מצומד לכל באר לדגור במשך 30 דקות באינקובטור לח. בתום הדגירה מעבירים את תא הלחות לארון בטיחות ביולוגי. שאפו את הסופרנאטנט באמצעות קצה שואף.
לאחר מכן, יש למרוח טיפה אחת של PBS על כל באר באמצעות פיפטה טפטפת סטרילית. לאחר הסרת PBS, שטפו את המגלשה פעמיים בצנצנת קופלין של PBS למשך 15 דקות בסך הכל. לאחר השטיפה, הניחו לשקופיות להתייבש באוויר ולאחר מכן הרכיבו את חלקת הכיסוי עם מדיית הרכבה.
קח את השקפים וקרא אותם תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. דרגו את הדגימות משליליות לארבע פלוס, כאשר דגימות שליליות אינן מראות פלואורסצנטיות וארבע דגימות פלוס המציגות פלואורסצנטיות ירוקה בוהקת. הקצה את הדגימות ואת ערך נקודת הקצה המיוצגים על-ידי גורם הדילול שבו הדגימה מציגה ציון פלוס אחד עד שניים.
לאחר החיסון הראשוני, רמות גבוהות של אימונוגלובולין M ו- G נצפו בדגימות החולים. כחצי שנה לאחר החיסון נמצאו רמות נמוכות משמעותית של שני הנוגדנים בדגימות החולים, אך רמות האימונוגלובולין M ירדו כמעט לחלוטין. 18 חודשים לאחר החיסון נוגדנים לאימונוגלובולין M לא זוהו בדגימות החולים.
רמות אימונוגלובולין G נמשכו ונשארו כמו אלה שזוהו בנקודת הזמן של שישה חודשים לאחר הירידה הראשונית מנקודת הזמן של שבועיים.
