כדי להתחיל, הפעל את המיקרוסקופ, מקור האור, המצלמה ומערכת היניקה. לשטיפת מערכת הזילוח, השתמשו בתמיסה של רינגר בתא הראשון ובתמיסת אבץ של רינגר בתוספת פיריתיון בתא השני. לאחר סגירת הברז, מלאו את התאים באותם פתרונות.
כדי להתחיל בהכנת הדגימה, הניחו את תא הזילוח כשהצד הצר של החריץ פונה כלפי מעלה ומרחו סיליקון איטום סביב החריץ. לאחר מכן, באמצעות טוויטר עדין, מעבירים מכסה בקוטר 13 מ"מ מתמיסת הכביסה על גבי החריץ כשהתאים פונים כלפי מטה. הניחו כיסוי 22 מ"מ על גבי הכיסוי בקוטר 13 מ"מ והדקו אותו באמצעות הטוויטר, תוך הקפדה שלא לפצח את הכיסויים.
הפכו את התא ולחצו עליו כדי לשחרר את הנוזלים. לאחר מכן, מלאו את החריץ ב-100 מיקרוליטר של תמיסת הכביסה של רינגר ולחצו שוב, כדי לוודא שאין דליפה. הרכיבו ואבטחו את תא הזילוח על הרציף.
לאחר מכן, חבר את צינורות הזילוח והיניקה לזילוח מעל התאים בחריץ. שנו את קצב הזילוח לכשני מיליליטר לדקה והפעילו את זילוח התמיסה של רינגר. עבור מדידות, פתח את תוכנת ההדמיה.
הגדר את הגדלת המיקרוסקופ ל -10X באמצעות הלחצן השמאלי של המיקרוסקופ. לאחר בחירת Live View, השתמש בג'ויסטיק כדי להזיז את הפלטפורמה ולהתמקד בתאים בחריץ. בחר את אורך הגל המתאים עבור mCherry.
לאחר מיקוד התאים, הזז את הפלטפורמה לבחירת טלאי התאים המתאימים. בחר בתפריט הנפתח צייר החזר השקעה. בחר צייר החזר השקעה מעגלי וצייר ROI על אשכולות תאים עם התאים המבטאים mCherry.
צור החזר השקעה חדש מעבר לראשון על-ידי לחיצה ממושכת על לחצן Shift ולאחר מכן על-ידי לחיצה וגרירה של החזר ההשקעה הקיים. בחר צייר החזר השקעה על רקע ריבועי מהתפריט הנפתח והתאם את המיקום והגודל של החזר ההשקעה על הרקע במקומות שבהם תאים אינם נמצאים. לאחר הבטחת היעדר תאים ברקע ROI, עבור אל הכרטיסייה רכישת ND.
בחר בכרטיסיה המשנה אורך גל וסמן את תיבת הסימון שלה. ודא שתיבת הסימון עבור אורך גל GFP מסומנת גם היא. לחצו על לשונית המשנה Time והגדירו את מרווח המדידה כ-כל חמש שניות ואת משך הזמן כ-30 דקות.
בחלונית המיקרוסקופ, לחץ על מופעל כדי להפעיל את מערכת המיקוד המושלמת, או PFS. תחת ND Acquisition, ודא ש- PFS מופעל מסומן. התאם את המוקד ולחץ על הפעל כעת.
התחל למדוד את פרק הזמן הבסיסי למשך 90 שניות באמצעות זילוח הפתרון של Ringer. לאחר 90 שניות, עברו מזילוח התמיסה של הצלצול לזילוח תמיסת האבץ של הצלצול, ולחצו על הדגל האדום בפינה השמאלית התחתונה של לוח הממשק הראשי ברגע שעליית הפלואורסצנטיות מתחילה להרוות. החליפו בחזרה לזילוח עם הפתרון של רינגר עד שזמן הניסוי יפוג.
כדי לייצא את הנתונים עם חיסור בסיסי, לחץ על לחצן תיקון רקע והצג את השינויים בחלון רכישת ND. לחץ על יצוא כפתור לשמירת הנתונים במיקום הרצוי. עלייה בפלואורסצנטיות נבעה מעלייה בריכוז האבץ התוך-תאי, ואילו ירידה הצביעה על פעילות של ZnT-1 המוביל אבץ דרך קרום התא.
לסוג הפראי ZnT-1 הייתה עקומת פלואורסצנטיות חלקה יותר מאשר למוטציה, הקשורה לשונות בתגובות התאיות לעומס אבץ. תרשים קופסה שהשווה את הפעילות של סוג בר ודלתא USCTD הראה שיעורי הובלה ממוצעים דומים, מה שמצביע על חוסר הבדל בין סוג הבר לבין המוטציה. עם זאת, ההבדל בהתפשטות עשוי להצביע על הבדל פונקציונלי.
