תוך כדי עבודה תחת מכסה מנוע זרימה למינרית מסוג 2, התחילו בשטיפה רציפה של רקמות השומן הפריווסקולריות או PVAT שנאספו מעכברים פעמיים. ראשית, באמצעות PBS המכיל 10%פניצילין-סטרפטומיצין, ולאחר מכן, באמצעות PBS בתוספת 1%פניצילין-סטרפטומיצין. מעבירים את הרקמות השטופות לצלחת פטרי סטרילית בקוטר 60 מ"מ ומוסיפים לה 200 מיקרוליטר של תמיסת עיכול.
באמצעות מספריים סטריליים, לטחון את הרקמות לחתיכות בעלות ממד של מילימטר מעוקב אחד. בעזרת מספריים סטריליים, חותכים קצה פיפטה מפלסטיק כדי להרחיב את קצהו. לאחר מכן מעבירים את תערובת הרקמה הטחונה לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר באמצעות קצה פיפטה רחב.
הוסף שישה מיליליטר של פתרון העיכול לרקמות כדי ליזום עיכול. לאחר קשירת הצינור אופקית על מתלה, לדגור אותו ב 37 מעלות צלזיוס בשייקר מסלול במשך 30 עד 45 דקות. כל 5 עד 10 דקות, הסר את הצינור מהשייקר באינקובטור ונער אותו ידנית למעלה ולמטה במרץ.
מעבירים את תערובת הרקמה המעוכלת דרך מסננת תאים של 70 מיקרון לתוך צינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר. שטפו את המסננת בנפח שווה של מדיום תרבית כדי למקסם את תפוקת התאים ולהרוות את העיכול. מעבירים את התסנין לצינור צנטריפוגה חדש בקוטר 15 מ"מ.
צנטריפוגה הצינור כדי לבודד את החלק כלי הדם סטרומה או SVF. הפוך את הצינור כדי להשליך את הסופרנאטנט והשהה מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר של PBS. צנטריפוגה את הצינור שוב ב 1, 800 G במשך חמש דקות לפני השלכת supernatant.
השהה מחדש את הגלולה בנפח מתאים של מדיום תרבותי. זרעו את התאים לתוך צלחת מצופה קולגן של 12 בארות ודגרו במשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה עם 5% פחמן דו חמצני. למחרת, סלקו פסולת תאים ותאי דם אדומים על ידי שאיפת מדיום התרבית ושטיפת התאים עם PBS בתוספת אנטיביוטיקה שחומם מראש ל -37 מעלות צלזיוס.
לבסוף, מוסיפים מיליליטר אחד של מדיום תרבית טרי לכל באר, וממשיכים לטפח את התאים עד שהם מגיעים לשלב הרצוי של מפגש.
