מספינת הביוריאקטור של המיכל המעורבב, עצור את בקרת הטמפרטורה pH ו- DO בבקר הביוריאקטור באופן זמני ושחרר באופן מלא את כל ה- PBS מהכלי לבקבוק הפסולת. ריתוך למודול סינון לשימוש חד פעמי ליציאה בשקית אחסון חד פעמית 10 ליטר. סנן והעבר את מדיום MSC המלא ללא סרום לתוך שקית האחסון.
כוונו את המשאבה במהירות אחת ל-300 סל"ד. ולהוציא ליטר אחד של מדיום משקית ההזנה לתוך הכלי. עצור את המשאבה.
ולהתחיל את הטמפרטורה pH מומס לעשות שוב, על פי הוראות היצרן. אטמו ונתק את הצינור המחבר את המשוב לצינור ההזנה. רתכו את הצינור מבקבוק מנשאי המיקרו המפוזרים לצינור ההזנה.
ולשאוב את כל התוכן מהבקבוק לתוך הכלי. לאחר מכן, השהה מחדש 2.5 פעמים 10 לשמונת HMCs בתווך ללא סרום והעבר אותם לבקבוק הריק שהכיל קודם לכן את מתלה המיקרו מוביל. מוסיפים מדיום ללא סרום ל-500 מיליליטר בסך הכל בתוך הבקבוק ומערבבים את תרחיף התא.
לשאוב את כל התכולה מהבקבוק לתוך הכלי. אטמו ונתקעו את הצינור המחבר את הבקבוק לצינור ההזנה ולאחר מכן רתכו בחזרה את שקית ההזנה. התאם את הגדרות התסיסה בבקר כדי להתחיל חיסון תאים לנשאי המיקרו.
ולהגדיר משטר אוטומטי של תוספים וחליפין בינוניים. רתכו את שקיות הדגימה החד פעמיות לצינור הדגימה. ולאסוף דגימות בנקודות הזמן הרצויות.
בזמן קצירת התאים על הבקר, הגדר את מהירות התסיסה לאפס עבור נושאות המיקרו להתיישב. ולחלק supernatant לתוך משטר ההזנה, משאיר כליטר אחד של תרחיף תרבית בכלי. רתכו את השקית המכילה 50 מיליליטר של תמיסת עיכול טרייה מוכנה ל-500 מיליליטר HBSS לדילול.
ולשאוב את כל התמיסה לתוך הכלי, דרך צינור ההזנה. הגדר את מהירות התסיסה בין 40 ל -45 סל"ד כדי להמיס את נושאי המיקרו. לאחר שמנשאי המיקרו התמוססו תוך 40 עד 60 דקות, רתכו את שקית האחסון החד פעמית של שלושה ליטר לצינור הקציר ושאבו לחלוטין את מתלה התא.
הפעל את מערכת עיבוד התאים במהלך קצירת תאים. ולהתקין ערכת עיבוד תאים חד פעמיים על המכשיר, על פי הוראות היצרן. רתכו את שקיות מתלי התא, חיץ הכביסה ואמצעי התרבית לערכה.
הזן את הפרמטרים התפעוליים והתחל בתהליך השטיפה וההשעיה האוטומטי. אסוף את דגימת התאים מתא הצנטריפוגה כפי שמצוין על ידי מערכות עיבוד התאים לצורך חישוב צפיפות התא. לאחר הספירה, התאימו מחדש את צפיפות התאים לפעמיים פי 10 לששת התאים למיליליטר, באמצעות המדיום המלא ללא סרום.
עבור תהליך ניסוח התא בביוריאקטור של 15 ליטר, השתמש במאגר הפורמולציה כדי להשהות מחדש את התאים שנקטפו. לרתך 250 מיליליטר של תאים מרחפים מחדש למילוי התא. הרכיבו את ערכת המילוי החד פעמית וסיימו את ערכת המילוי המתכלה במערכת מילוי התא.
והפעל את מערכת קדם-הקירור, בהתאם להוראות היצרן לפני שהתאים הושעו מחדש. בצע את ההוראות על המערכת ולהגדיר אותו למלא 30 מיליליטר לכל שקית עם סך של 20 שקיות בכל סט. רתכו את הסט החדש של 20 שקיות שימור בהקפאה לערכת המילוי והגימור המתכלה החד פעמית וחזרו על המילוי והגימור עד שכל התאים יתעוררו.
עבור hMSCs, התרחבות מצטברת של פי 128 הושגה עם כדאיות תאים מעל 90% צריכת גלוקוז הראתה מתאם שלילי עם התרחבות התא, מראה מטבוליזם הקשור לצמיחת תאים בריאה. MSCs שזה עתה נקטפו שומרים על סמנים פנוטיפיים קלאסיים עם יותר מ- 95% ביטוי עבור סמנים חיוביים ופחות מ -2% עבור סמנים שליליים. התאים שהשתמרו בהקפאה הראו היצמדות טובה, התנהגות התפשטות נורמלית וצורת ציר אופיינית עם צמיחה ספירלית לאחר הפשרה וציפוי מחדש לצלוחיות דו-ממדיות.
יתר על כן, התאים גם שמרו על יכולתם להתמיין לשושלות אוסטאוגניות, אדיפוגניות וכונדרוגניות. ניתן לאמץ פלטפורמה זו גם לטיפוח תאים אחרים תלויי עיגון, כגון תאי HEK293T ותאי ורו. לאחר תהליך העברת B2B בביוריאקטור של 15 ליטר, HEK293T התאים הגיעו לריכוז שיא של 1.68 פעמים 10 מתוך שבעת התאים למיליליטר.
בעוד שתאי ורו הגיעו לריכוז של 1.08 כפול 10 לשבעת התאים. שני סוגי התאים שמרו על כדאיות גבוהה.
