הפרדת רקמות מארח אלמוגים ותאי Symbiodiniaceae למיצוי מטבוליטים

הומוגניזציה של דגימת האלמוגים עם הומוגנייזר מכני של שיני מסור למשך דקה אחת עד שהדגימה הומוגנית במלואה ולא נראים גושים. לנורמליזציה, אספו אליציטוט של מיליליטר אחד מהרקמה ההומוגנית עבור ספירת תאי Symbiodiniaceae, ניתוח תכולת חלבון ברקמת האלמוגים והערכת כלורופיל-A. אם מפרידים את החומר המארח ואת תאי האצות, צנטריפוגות את האלמוגים הנותרים הומוגנט ב 2, 500 G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס.

מעבירים את הסופרנאטנט המכיל את החומר המארח לצינור חדש של 15 מיליליטר. הוסיפו שני מיליליטר מים קרים וטהורים במיוחד לגלולת האצות ומערבלים גם חומר מארח וגם גלולת אצות למשך שתי דקות להשעיה מחדש. צנטריפוגות שוב את כל הדגימות ומעבירות את הסופרנאטנט המכיל את החומר המארח לצינור חדש של 15 מיליליטר.

לאחר השלכת הסופרנאטנט מגלולת האצות, שמרו את הגלולה בצינור המקורי של 15 מיליליטר. בריז או הומוגנט הולוביונט או המארח המופרד בשברים Symbiodiniaceae במינוס 80 מעלות צלזיוס במשך שעתיים לפחות. לאחר מכן, בצע ליופיליזציה של הדגימות למשך הלילה עם שואב אבק של 0.01 מיליבר במינוס 85 מעלות צלזיוס.

לאחר הייבוש, יש לשקול כל דגימה במאזן מעבדה לצינורות מיקרוצנטריפוגות נפרדות של שני מיליליטר, ללא פלסטיסייזר. הדמיה מיקרוסקופית לא גילתה תאי Symbiodiniaceae בדגימות רקמת המאכסן לאחר שלושה שלבי שטיפה. באופן דומה, רקמת מארח מינימלית נמצאה בשברים סימביונטיים.

עם זאת, ההומוגנט ההולוביונט הצביע על כך ש-Symbiodiniaceae תוך-תאיים לא שוחררו מהסימביוזומים שלהם באמצעות צחצוח אוויר פשוט.