כדי להתחיל, הניחו את נושא השבב והשבב בעריסה הממוקמת בצלחת תרבית רקמה סטרילית ושמרו אותו בצד במכסה המנוע של תרבית הרקמה בזמן הכנת מגיב הפעלת השבב. הוסף מיליליטר אחד של תמיסת CR2 לבקבוקון המכיל אבקת CR1. מעבירים את התמיסה מהבקבוקון לצינור 15 מיליליטר עטוף ברדיד אלומיניום.
חזור על תהליך זה עד שארבע שטיפות וארבעה מיליליטר של CR2 נשטפו דרך בקבוקון CR1. לשטיפה האחרונה, מכסים את הבקבוקון והופכים אותו כדי להסיר שאריות אבקה. לאחר מכן, הוסף שישה מיליליטר של CR2 לצינור 15 מיליליטר המכיל CR1.
מערבבים את הפתרון הסופי של 10 מ"מ עם פיפטה מבלי להכניס בועות. באמצעות קצה פיפטה של 200 מיקרוליטר, הוסף 20 מיקרוליטר של תמיסת CR1 לכניסת הערוץ התחתון של השבב עד שהתמיסה מתחילה לצאת משקע הערוץ התחתון. הוסף 50 מיקרוליטר של תמיסת CR1 דרך פתח הערוץ העליון עד שהפתרון מתחיל לצאת משקע הערוץ העליון.
לאחר מכן, מניחים את השבבים תחת אור אולטרה סגול במשך 15 דקות. לאחר החשיפה, הסר כל פתרון CR1 מהערוצים העליונים והתחתונים. שטפו את שני הערוצים עם 100 מיקרוליטר של תמיסת CR2.
לאחר מכן, לשטוף פעמיים עם 100 מיקרוליטר של DPBS. הכן את פתרונות המטריצה החוץ תאיים עבור הערוצים העליונים והתחתונים של השבב. הוסף 50 מיקרוליטר של תמיסת מטריצה חוץ-תאית לכניסת הערוץ התחתונה עד שהטיפה תופיע על השקע.
לאחר מכן, הוסף 50 מיקרוליטר לכניסת הערוץ העליונה עד שהטיפה תופיע על המפרצון. הוסף DPBS למאגר עריסת השבב. מניחים את המכסה על הצלחת ודגרים על השבבים למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ואינקובטור של 5% פחמן דו חמצני.
למחרת, שטפו את האפיתל או את הערוץ העליון של השבב עם 100 מיקרוליטר של מדיה להרחבת שבב שחומם מראש. לאחר מכן, לשטוף את האנדותל או ערוץ התחתון עם 100 מיקרוליטר של מדיה HIMEC שחומם מראש. לאחר הספירה, להוסיף 10 מיקרוליטר של HIMECs לערוץ האנדותל.
במידת הצורך, הוסף מצע גידול אורגנואידי או מדיה להרחבת שבב לערוץ האפיתל ובדוק את צפיפות הזריעה של HIMECs. לאחר מכן, הפכו את השבב לעריסת השבב הממוקמת בצלחת תרבית התא, הוסיפו DPBS למאגר בעריסה של השבב, והניחו את השבב על 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים-שלוש כדי לאפשר ל-HIMECs להיצמד לקרום השבב. לאחר הדגירה, להחזיר את עריסת השבב למצב זקוף.
שטפו בעדינות את תעלת האנדותל עם 100 מיקרוליטר של מדיה חמה של HIMEC ואת ערוץ האפיתל עם מדיה לגידול אורגנואידים או מדיה להרחבת שבב, והשאירו את המדיה בערוץ. עבור קציר enteroids, בעדינות לשאוף את התקשורת ולשטוף את הבארות המכילות הידרוג'ל מטריצת תרבית תאים עם 500 מיקרוליטר של DPBS חם. הוסיפו 250 מיקרוליטר של תמיסת שחזור תאים קרים לכל באר וגרדו את תחתית כל באר עם קצה פיפטה טרי כדי לשבש הידרוג'ל מטריצת תרבית תאים.
הוסיפו את תרחיף התאים המשובש לצינור קר של 15 מיליליטר על קרח ודגרו במשך 45 דקות. לאחר הדגירה, צנטריפוגו את המתלה והסירו את הסופרנטנט. לאחר מכן, הוסף שני מיליליטר של מדיה דיסוציאציה אנטרואידית חמה לגלולה ומניחים את הצינור באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס.
במשך 60 עד 120 שניות, לאחר מכן, הוסף 10 מיליליטר של מדיה לשטיפת רקמות קרות לצינור. לאחר מכן, צנטריפוגה ולהסיר את supernatant לפני resuspending את הגלולה ב 200 מיקרוליטר של מדיה הרחבת שבב. באמצעות פיפטה P200, לנתק את enteroids ולהוסיף את המתלה לתוך צינור מיקרו צנטריפוגה 1.5 מיליליטר.
ספור את התאים והתאם את נפח מדיית הרחבת השבב כדי להשיג ריכוז של שש פעמים 10 לששת התאים למיליליטר. לאחר מכן, הוסף 30 מיקרוליטר של השעיית תאים מרחפים לערוץ העליון של השבב. לאחר החזרת השבבים לעריסת השבב, הוסיפו DPBS למאגר ודגרו על השבבים למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני.
למחרת, שטפו את תעלת האפיתל פעמיים עם 100 מיקרוליטר של מדיה להרחבת שבב ואת תעלת האנדותל עם 100 מיקרוליטר של מדיה HIMEC. לאחר מכן, הוסף שני מיליליטר של מדיית הרחבת השבב למאגר כניסת הערוץ העליון ו -300 מיקרוליטר למאגר יציאת הערוץ העליון. הוסף שני מיליליטר של מדיה HIMEC למאגר הכניסה של הערוץ התחתון ו -300 מיקרוליטר למאגר שקע הערוץ התחתון.
קיפו את התרמילים והוסיפו את הצ'יפס לתרמילים. לאחר מכן הוסף את התרמילים למודול התרבית. קבעו קצב זרימה של 30 מיקרוליטר לשעה והתחילו את המחזור.
תאי האפיתל של המעי שגדלו באמצעות מעי היילוד על שבב יצרו חד-שכבה של תאים מתמזגים, ובהמשך התפתחו למבנה תלת-ממדי בוגר דמוי וילוס (villus). הוספת מיקרוביום דיסביוטי מיילוד עם אנטרוקוליטיס נמקית חמורה למעי היילוד במודל שבב הראתה ביטוי מוגבר של TNF-אלפא בהשוואה לקבוצת הביקורת.
