הפשרת נוירוני mDA אנושיים שמקורם ב-iPSC לצורך זריעה

כדי להפשיר את הנוירונים ביום הזריעה, מראש לחמם את אמבט המים ל 37 מעלות צלזיוס. כמו כן, אזנו את מדיית התחזוקה המלאה לטמפרטורת החדר תוך הגנה עליה מפני אור. בינתיים, הסר את הבקבוקון המכיל את הנוירונים הקפואים שהושגו מסחרית ממיכל החנקן הנוזלי והעבר אותו לקרח יבש.

לאחר מכן מניחים את הבקבוקון באמבט המים ב 37 מעלות צלזיוס למשך שתי דקות כדי להבטיח הפשרה מלאה. לאחר מכן, לחטא את הבקבוקון באמצעות אתנול 70%. באמצעות פיפטה P1000, להעביר את כ 370 מיקרוליטר של נוירונים מופשרים מן הבקבוקון אל צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר.

שטפו את הבקבוקון הריק עם 630 מיקרוליטר של אמצעי תחזוקה מלאים. ובאמצעות פיפטה, מוציאים את התווך בטיפה לתוך צינור 50 מיליליטר בזווית של 45 מעלות. באופן דומה, באמצעות פיפטה P1000, הוסף מיליליטר אחד של אמצעי תחזוקה מלא לצינור הצנטריפוגה של 50 מיליליטר.

לאחר מכן להוסיף לאט שני מיליליטר נוספים של אמצעי תחזוקה מלאה לתוך הצינור. לאחר מכן, מערבבים 10 מיקרוליטר של כחול טריפאן עם 10 מיקרוליטר של השעיית התא בצינור מיקרו. לאחר מכן הוסף 10 מיקרוליטר של התערובת לשקופית תא ספירה לספירת תאים.

לאחר ספירת תאים והעברת תאי העצב לצינור של 15 מיליליטר, צנטריפוגה במשקל 400 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להסיר את supernatant. באמצעות פיפטה P1000, בזהירות להשעות מחדש את גלולת נוירון במיליליטר אחד של אמצעי תחזוקה מלא.

לבסוף, להוסיף את נפח הדרוש של המדיום כדי להשיג את הריכוז הרצוי עבור זריעת הנוירונים באותו יום.