התחל על ידי טריפסיניזציה של תאי גזע מזנכימליים אנושיים כדי ליצור תרחיף תאים. לאחר מכן, aliquot את השעיית התא לתוך צינור 1.5 מיליליטר כדי ליצור 10 מבנים. לאחר צנטריפוגה של המתלה במשקל 220 גרם למשך שלוש דקות, השתמשו במשאבת ואקום כדי להסיר את הסופרנטנט.
כעת, הניחו את גלולת התא על קרח. לאחר מכן, הביאו לטמפרטורת החדר את החומצה ההיאלורונית המעובדת בתיול, קרוסלינקר תגובתי של תיול, דיאקרילט פוליאתילן גליקול ובקבוקי מים נטולי גזים. בתנאים סטריליים, השתמשו במזרק מצויד במחט כדי להוסיף מיליליטר אחד של מים נטולי גז לבקבוק המכיל חומצה היאלורונית.
מערבבים את התמיסה, מדי פעם מחממים אותה ל-37 מעלות צלזיוס עד שהיא מתבהרת. לאחר מכן, הניחו את התמיסה על קרח. בתנאים סטריליים, יש להוסיף 5 מיליליטר מים נטולי גז לבקבוק הקרוסלינקר.
יש להמיס על ידי היפוך חוזר ונשנה לפני הנחתו על קרח. כעת, הוסיפו 120 מיקרוליטר של תמיסת החומצה ההיאלורונית המומסת לגלולת התא האליציטוטית והשהו מחדש את כדורית התא על ידי פיפטציה של התמיסה קדימה ואחורה. הוסף 30 מיקרוליטר של תמיסת crosslinker מומס לתוך הצינור עם גלולת התא resuspended.
ודא ערבוב נכון על ידי הקשה על הצינור. לאחר הערבוב, סובבו בקצרה את התמיסה. זרוק 15 מיקרוליטר של התמיסה המשולבת על צלחת 24 בארות מצופה פרפין.
אפשר לו להתמצק ב 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. להתמיינות במבחנה, הוסף 0.5 מיליליטר של מדיום התמיינות כונדרוגנית להידרוג'לים היושבים בתאים. לאחר שלושה שבועות, לעבור למדיום התמיינות היפרטרופי, הוספת 0.5 מיליליטר לכל באר.
התמיינות כונדרוגנית הביאה לגליקוזאמינוגליקנים סולפטים במטריצה חוץ-תאית חיובית של קולגן מסוג 2 הן בחומצה היאלורונית והן בחומצה היאלורונית או במבנה החומצה ההיאלורונית והקולגן. עם זאת, ההתפלגות הייתה הומוגנית יותר במבני החומצה ההיאלורונית. מבני הקולגן הדגימו תאים היקפיים עם מורפולוגיה הטרוגנית.
המעוגלות הממוצעת של תאים במבני חומצה היאלורונית הייתה גבוהה יותר מאשר במבני הקולגן. שקיעת סידן זוהתה בקצוות החיצוניים של שני המבנים לאחר חמישה שבועות. במבני ה-in vivo HA, כל השתלים חוברו זה לזה בכיסים תת-עוריים ויצרו רקמת עצם משולבת.
40% ממבני הקולגן in vivo היו עצמאיים. רקמת אוסטנואיד עם מורפולוגיה למלרית נוצרה באזורים החיצוניים של שני מבני in vivo בשמונה שבועות לאחר ההשתלה. אובדן סחוס נצפה גם במבנה HA.
נראה כי מבני HA מרובים in vivo יצרו רקמת עצם משולבת כפי שצוין על ידי החיבור לרקמות העצם ונוכחות של רקמה סיבית משותפת. בעוד 40% ממבני הקולגן היו מאוחדים, שאר המבנים התקיימו בנפרד או חוברו רק ללא חיבורים גרמיים. שני המבנים הראו כלי דם בעלי תווית חיובית במוח העצם, והסחוס הפנימי היה מוקף בתאי אוסטאוקלסט מרובי גרעינים.
המינרל שוקע באזור האוסטואידים החיצוני של שני המבנים בעלי נפח מינרלי גבוה יותר ומבני HA בשל גודלם הגדול יותר.
