כדי להתחיל, לתקן את הגפיים של עכבר מורדם עם סרט דבק. החזיקו את עור הבטן כלפי מעלה וחתכו בזהירות לאורך היקף בית החזה כדי לחשוף אותו במלואו. בצע חתך קטן באטריום הימני עם מספריים אופתלמיים ומיד להכניס מחט זילוח 22 מד בקודקוד החדר השמאלי.
ואז לדחוף 30 עד 50 מיליליטר של נוזל זילוח הלב דרך המזרק. לאחר שנוזל הזרימה מהאטריום הימני הופך ברור לחלוטין, להחדיר נפח שווה של תמיסת PFA 4%. נתחו את הרקמות והאיברים וקבעו אותם למשך הלילה עם 4% PFA בארבע מעלות צלזיוס.
כדי לגרום decalcification רקמות. הניחו את רקמת הלב הקבועה ב-10 מיליליטר של תמיסת EDTA על שולחן רועד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. דוגרים במשך כיומיים ומחליפים את הנוזל מדי יום.
הניחו את עצמות הקלבריה הקבועות ב-20 מיליליטר של תמיסת קוואדרול 25% להסרת צבע הרקמות. דוגרים על שולחן רעד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך יום אחד ומחליפים את הנוזל פעם אחת. לאחר מכן, הניחו את הרקמה ברצף בתמיסת 30% בוטנול שלישוני או שחפת.
לאחר מכן פתרון 50% TB, ולאחר מכן פתרון 70% TB לביצוע הסרת שומנים הדרגתית. לאחר מכן יש לייבש את הדגימות ואת תמיסת TB PEG למשך שש שעות על שולחן רועד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לבסוף, הניחו את הרקמה המיובשת לחלוטין בתמיסת BB PEG על שולחן רעד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
לאחר שעתיים עד ארבע שעות של דגירה, הרקמה תהפוך לשקופה. שיטת ניקוי הרקמה של פגסוס הביאה לרקמה שקופה. רקמה מנוקה עם צביעת EDU של הר שלם הראתה כי התיוג היה יעיל ושמור היטב.
בקבוצת הביקורת, מספר תאים חיוביים ל-EDU פוזרו באופן מפוזר לאורך התפרים. לאחר יום אחד של הרחבת התפרים, נצפו תאים מתרבים במרכז ובקצוות התפר. ככל שהתפר התרחב, מספר התאים המתרבים ירד עם הזמן.
התאים המסומנים בירוק היו תאים עגולים קטנים במוח העצם, שהיו שונים מתאי התפר החיוביים של EDU.
