כדי להתחיל, מניחים את דגימות קריש הדם המוחי שנאספו על צלחת נקייה באמצעות פינצטה. לאחר מכן, באמצעות פיפטה, להוסיף חמישה מיליליטר של מלוחים פיזיולוגיים אליו בעדינות לנער את המנה. מוציאים את המלח בעזרת פיפטה.
בעזרת זוג מספריים, קוצצים את הקרישים לחתיכות קטנות. שוב, מוסיפים חמישה מיליליטר של מלח פיזיולוגי לקרישי הדם ומנערים את התבשיל בעדינות לפני ששואפים את המלח עם פיפטה. לאחר מכן, באמצעות פינצטה, מעבירים את חתיכות הקרישים לצלחת U חדשה ונקייה.
הכן את פתרון העבודה SFE על ידי התאמת הריכוז של SFE ל 2, 000 יחידות למיליליטר באמצעות מלוחים פיזיולוגיים. הוסף 300 מיקרוליטר של פתרון העבודה SFE לקרישי הדם שטופלו מראש. כדי להתחיל את הסבב הראשון של השפלה, לדגור על תערובת SFE וקרישי דם ב 37 מעלות צלזיוס במשך חצי שעה.
לאחר מכן, נערו בעדינות כדי לערבב את הדגימה שטופלה ב-SFE. ובאמצעות פיפטה נקייה, להעביר את החלק הנוזלי לצינור סטרילי. הניחו בצד את הקריש שנותר לסבב נוסף של השפלה.
צנטריפוגה את הנוזל שנאסף ב 200 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, באמצעות פיפטה, להעביר את supernatant או פתרון SFE התאושש לצינור נקי אחר. השהה מחדש את גלולת התא המתקבלת ב -50 מיקרוליטר של מלח פיזיולוגי על ידי ערבוב עדין.
לאחר מכן, בצע סבבים עוקבים של השפלה על הקרישים הנותרים באמצעות תמיסת SFE שהתאוששה כפי שהודגם קודם לכן. אספו את תערובת התאים מכל סבב פירוק כדי להכין את דגימת תאי הדם. הוסף חמישה מיקרוליטרים של דגימת התא המתקבלת לשקופית זכוכית מצופה פולי-L-ליזין.
ובאמצעות תלוש כיסוי, למרוח את התאים. אפשרו לנוזל להתאדות בטמפרטורת החדר. לביצוע צביעת התא, יש להוסיף בעדינות 100 מיקרוליטר של צבע זכויות למריחת התא.
הניחו לתאים להכתים במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר לפני ששטפו בעדינות את הצבע במים נקיים. לבסוף, בחנו את התאים המוכתמים באמצעות מיקרוסקופ אור. קרישי דם אדומים קומפקטיים עם פתרון עבודה חסר צבע נצפו בשלב המוקדם של השפלה.
המסת קריש נצפתה לאחר דגירה של 30 דקות ודגירה ממושכת של עד חמש שעות המסת רוב הקרישים, בעוד שלא היה שינוי משמעותי בקבוצת הביקורת השלילית, גם לאחר דגירה של 10 שעות. לאחר צביעה נכונה, תאי דם אדומים בוגרים, טסיות דם וגרנולוציטים שונים זוהו בבירור תחת מיקרוסקופ אור. ניתן לנתח כמותית את מרכיבי התא בעזרת אוטוהמטולוגיה בהצלחה.
