כדי להתחיל, לרסס את העכבר המתת חסד עם 75% אלכוהול. לאחר מכן עיקרתם מספריים מנתחים כדי לפתוח את העור ולחשוף את חלל החזה. חותכים את הסרעפת, ואז ממשיכים לחתוך כלפי מעלה לכיוון הלסת התחתונה ומסירים בזהירות עודפי רקמות חיבור ושומן החושפים את עורק התרדמה.
לאחר מכן, לחתוך את נבוב הווריד התחתון כדי לגרום לדם לזרום מתוך מחזור הדם סגור. באמצעות מזרק להזריק באיטיות 20 מיליליטר של פתרון זילוח מראש צונן לתוך החדר השמאלי. מקם את העכבר מתחת למיקרוסקופ סטריאוסקופי.
לאחר מכן בעזרת מספריים לניתוח מיקרו, לקלף את השומן ואת רקמות החיבור סביב עורק התרדמה. בודדו את עורק התרדמה ושטפו אותו עם PBS כדי לשטוף את שאריות הדם. מעבירים את העורק לצלחת שש בארות המכילה 1.5% FBS על קרח.
בעזרת מספריים לניתוח מיקרו, נתחו את עורק התרדמה לאורכו והניחו אותו שטוח בצלחת חדשה בת שש בארות המכילה מיליליטר אחד של FBS על קרח. בזהירות לשטוף את האינטימה של העורק עם FBS כדי להסיר את הדם שיורית. חותכים את העורק לחתיכות רקמה מרובעות של שני מילימטר ומעבירים אותם לצינור צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר.
צנטריפוגה ב 400 גרם במשך 5 דקות ב 4 מעלות צלזיוס כדי לשקוע את הרקמות לתחתית. השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את הרקמות ב 500 מיקרוליטר של מגיב דיסוציאציה A. הניחו את הצינור באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת, תוך פייפה עדינה עם פיפטה של מיליליטר אחד כל 10 דקות. לאחר מכן להוסיף 500 מיקרוליטר של 5% FBS לתוך הצינור ולערבב היטב.
סננו את תרחיף התא דרך מסננת תאים סטרילית של 40 מיקרון לתוך צינור של 1.5 מיליליטר. לאחר מכן צנטריפוגו את התסנין והוציאו את הסופרנאטנט לפני שתשהו מחדש את הגלולה ב -200 מיקרוליטר של מגיב דיסוציאציה B.הניחו את הצינור באמבט מים כדי לנתק תאים באופן מלא לתרחיף תא יחיד. לאחר חמש דקות, הוסיפו 200 מיקרוליטר של 5% FBS כדי לסיים את תגובת העיכול, צנטריפוגו את התרחיף, והשליכו את הסופרנאטנט לפני שתשהו מחדש את הגלולה ב-100 מיקרוליטר PBS על קרח.
תצפיות מיקרוסקופיות הראו כי שילוב של מגיב דיסוציאציה B עם מגיב A הוביל לדיסוציאציה יסודית יותר של רקמת עורק התרדמה בהשוואה לשימוש בריאגנט דיסוציאציה A בלבד. בסך הכל נאספו 176, 000 תאים בודדים מתשעה קרוטידים, כאשר רוב כלי הדם נותקו בהצלחה לתאים בודדים בעלי כדאיות גבוהה. לאחר העיכול, אשכולות ללא פיקוח מבוססי SIRAH חשפו ארבעה סוגי תאים עיקריים בעורקי התרדמה הרגילים של עכברים.
