התחל על ידי חיבור מפריד מגנטי למעמד שלה. חבר עמודת בחירה למפריד המגנטי והנח מסננת תאים של 70 מיקרון על גבי עמודת הבחירה. הניחו צינור של 50 מיליליטר מתחת לעמוד הבחירה כדי לאסוף את הזרימה.
ברגע שתאי המוח של העכבר מגיעים למפגש של 80%, שאפו את התווך ושטפו את התאים עם PBS. הוסיפו 0.25% טריפסין כדי לנתק את תאי ההיצמדות ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות. לאחר מכן הוסף מאגר עצירה.
צנטריפוגו את מתלה התא ב-300 גרם למשך חמש דקות, והוציאו את הסופרנטנט. עבור צביעת נוגדנים, להשהות 10 לשבעת התאים ב 100 מיקרוליטר של PBS. לאחר מכן להוסיף 10 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים LYVE-1 ולערבב היטב.
דוגרים על התערובת במשך 30 דקות בחושך בארבע מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, צנטריפוגות את התאים ומשליכות את הסופרנטנט. לאחר מכן שטפו את התאים על ידי הוספת מיליליטר אחד של PBS וצנטריפוגה ב -300 גרם למשך חמש דקות.
לסימון מיקרו-חרוזים, יש להשהות מחדש את הגלולה ב-100 מיקרוליטר PBS וב-20 מיקרוליטר מיקרו-חרוזים. להתנפח ולדגור במשך 30 דקות בחושך בארבע מעלות צלזיוס. ואז צנטריפוגה את המתלה ולשטוף את הגלולה עם מיליליטר אחד של PBS.
שוב, צנטריפוגה ולהשהות מחדש את הגלולה בארבעה מיליליטר של PBS להרחקה שלילית מגנטית. העבירו את תרחיף התא דרך מסננת של 70 מיקרון כדי לסלק גושים. הכן את עמודת הבחירה על ידי שטיפתה בשלושה מיליליטר PBS.
לאחר מכן הוסף השעיית תאים לעמודת הבחירה. שטפו את העמוד עם שלושה מיליליטר של PBS ואספו תאים שליליים של LYVE-1 לתוך צינור של 50 מיליליטר. עבור ברירה חיובית מגנטית, פיפטה שישה מיליליטר של PBS לתוך עמודת הבחירה.
לאחר מכן שטפו את התאים המסומנים מגנטית על ידי דחיפת הבוכנה בחוזקה לתוך עמודת הבחירה כדי לקבל LLECs חיוביים של LYVE-1. לאחר מכן, צנטריפוגו את מתלה התא החיובי והסירו את הסופרנטנט. צלחת 10 עד התאים החמישיים לסנטימטר מרובע לתוך בקבוק T25 עם חמישה מיליליטר של תווך תרבית.
לשמור על התרבות על ידי החלפת 50% של המדיום כל יום לסירוגין. כאשר התאים מגיעים למפגש של 80%, נתקו אותם כפי שהודגם קודם לפני ביצוע מעבר התא. ניתוח ציטומטריית זרימה גילה כי אחוז התאים החיוביים LYVE-1 במעבר השני לא היה שונה באופן משמעותי מהמעבר השלישי לאחר MACS, מה שמצביע על טוהר גדול מ-95%צביעה אימונופלואורסצנטית אישרה צביעה משותפת של LYVE-1 עם PDPN, VEGFR-3 ו-PROX1, וקבעה את זהותם של LLECs.
תאים חיוביים של LYVE-1 לא ביטאו F48 ובטא של גורם גדילה שמקורו בטסיות, מה שהבדיל ביעילות בין LLECs לבין מקרופאגים ופיברובלסטים. תאים לפטומנינגיאליים לפני MACS הציגו מורפולוגיה הטרוגנית החל מכדוריות עגולות ועד צורות סיבים מאוחים. עם זאת, לאחר MACS, LLECs הציגו תכונות טיפוסיות דמויות אנדותל כגון ציר וצורות מרוצפות.
