Preparing Cells to Assemble a 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

116 Views

•

02:05 min

•

October 20th, 2023

DOI :

10.3791/200667-v

October 20th, 2023

•

Camille Goldman*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Natalie Suhy*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Jessica E. Schwarz¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Emily Ruth Sartori¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Rikki B. Rooklin¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Braxton R. Schuldt¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Louise A. Mesentier-Louro¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Joel W. Blanchard¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Icahn School of Medicine at Mount Sinai, ²Black Family Stem Cell Institute at Mount Sinai, ³Ronald M. Loeb Center for Alzheimer’s Disease at Mount Sinai, ⁴Friedman Brain Institute at Mount Sinai, ⁵Nash Family Department of Neuroscience at Mount Sinai

* These authors contributed equally

Transcript

התחילו בהכנת תאי אנדותל, טפילים ואסטרוציטים ממוינים להרכבת מודל iBBB. לאחר שאיפת מדיום תרבית התאים מתאי האנדותל המתמיינים, שטפו את התאים עם PBS פעם אחת, ואז הוסיפו תערובת פרוטאז קולגנאז לתאים שנשטפו ונתקו את התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות. העבירו את תערובת הפרוטאז קולגנאז עם התאים המנותקים לתוך צינור חרוטי המכיל hECSR, תוך שמירה על יחס של 1:3 בין התערובת ל-hECSR, ואז צנטריפוגו את התאים ב-300 גרם למשך שלוש דקות ושאפו את הסופרנאטנט לפני שתשהו מחדש את כדורית התא המתקבלת ב-hECSR.

נתקו את הטפילים המובחנים עם תערובת פרוטאז קולגנאז בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות. מוסיפים את הכמות המתאימה של N2B27 בצינור חרוטי ומעבירים אליו את התאים המנותקים בתערובת פרוטאז קולגנאז, תוך שמירה על יחס של 1:3 בין התערובת ל-N2B27. סובב את התאים ב 300 G במשך שלוש דקות.

לאחר שאיפת הסופרנטנט, השהה מחדש את גלולת התא ב- N2B27. נתקו את האסטרוציטים המובחנים עם תערובת פרוטאז קולגנאז בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות. מעבירים את התאים המנותקים בתערובת פרוטאז קולגנאז לצינור חרוטי המכיל תווך אסטרוציטים שלם ביחס של 1:3 בין התערובת לתווך.

לאחר צנטריפוגה של התאים ב 300 גרם במשך שלוש דקות, שואפים את supernatant ו resuspend את גלולת התא בתווך אסטרוציטים שלם. התאים מוכנים כעת להרכבת iBBB.

Explore More Videos

3D Human stem cell derived

In Vitro Blood Brain Barrier

Differentiated Endothelial Cells

Protease Collagenase Dissociation

HECSR

Differentiated Parasites

N2B27

Differentiated Astrocytes

Complete Astrocyte Medium

IBBB Assembly