Constructing the 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

119 Views

•

02:08 min

•

October 20th, 2023

DOI :

10.3791/200668-v

October 20th, 2023

•

Camille Goldman*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Natalie Suhy*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Jessica E. Schwarz¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Emily Ruth Sartori¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Rikki B. Rooklin¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Braxton R. Schuldt¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Louise A. Mesentier-Louro¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Joel W. Blanchard¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Icahn School of Medicine at Mount Sinai, ²Black Family Stem Cell Institute at Mount Sinai, ³Ronald M. Loeb Center for Alzheimer’s Disease at Mount Sinai, ⁴Friedman Brain Institute at Mount Sinai, ⁵Nash Family Department of Neuroscience at Mount Sinai

* These authors contributed equally

Transcript

הרכיבו את מחסום הדם-מוח האנושי שמקורו בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים, או iBBB, באמצעות תאי אנדותל מנותקים, טפילים ואסטרוציטים, שלבו את שלושת סוגי התאים בצינור חרוטי תוך הכללת 10% יותר ממספר התאים המחושב כדי להסביר טעויות צנרת. סובבו את תערובת התאים ב-300 גרם למשך שלוש דקות. שואפים את הסופרנטנט, ומשאירים את גלולת התא עם כ -50 מיקרוליטר של המדיום.

בעזרת פיפטה P200, השהה בעדינות את כדורית התא בתווך השיורי כדי ליצור תרחיף של תא בודד. הניחו את הצינור המכיל את תרחיף התאים שנוצר על קרח והוסיפו אליו כמות מספקת של מטריצת קרום מרתף GF מופחתת לכל מספר iBBB הרצוי. מערבבים את התאים בצורה הומוגנית מבלי להכניס בועות אוויר.

פיפטה 50 מיקרוליטר של תערובת מטריצת התא המתקבלת לתוך באר של צלחת תרבית 48 באר או 96 באר תחתית זכוכית ולהפיץ אותו באופן שווה לאורך כל החלק התחתון של המנה. דוגרים על המנה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 עד 40 דקות כדי לפלמר את המטריצה תוך עטיפת התאים. לבסוף, להוסיף 500 מיקרוליטר של תווך אסטרוציטים בתוספת לבאר ולשמור על iBBBs בתרבית.

עבור צלחת של 96 בארות, הוסף 100 עד 150 מיקרוליטר של בינוני לבאר עד שהם מפותחים מספיק עבור בדיקות במורד הזרם, אשר בדרך כלל לוקח שבועיים. ה- iBBB שנוצר כראוי הופיע כדיסק מוצק, שקוף יחיד תחת מיקרוסקופ שדה בהיר. לאחר 24 שעות, זוהו תאים בודדים מפוזרים באופן שווה.

לאחר שבועיים נראו מבנים מובחנים יותר, אם כי קשים להגדרה.

Explore More Videos

3D Human stem cell derived

In Vitro Blood brain Barrier

IBBB

Dissociated Endothelial Cells

Reduced GF Basement Membrane Matrix

Cell Matrix Mixture