כדי להתחיל, הזריקו לעכבר וקטורים הקשורים ל-AAV לתוך מוח העכבר. לאחר שלושה עד ארבעה שבועות של הזרקת וירוס, לגלח את אזורי הגחון והגב של הצוואר של עכבר מורדם. נקו את האזורים המגולחים באמצעות שלושה פילינג יוד בסיבוב עם תמיסת אתנול 70%.
בצע חתך גחוני בעור בין השכמות. לאחר מכן, הניחו גזה כירורגית מעל החתך ומקמו את החיה במצב שכיבה, כשראשה פונה לכיוון המנתח. לאחר מכן בצע חתך אנכי קטן בצד ימין של הצוואר, מעל עצם הבריח, כדי לחשוף את עורק התרדמה הימני ואת וריד הצוואר.
לאחר הפרדת הרקמה התת עורית, חושפים את וריד הצוואר החיצוני הימני ומניחים את התפר מתחת לווריד. קשרו את הקצה הדיסטלי של הווריד הצווארי כדי לעצור את זרימת הדם. באמצעות מיקרו מלקחיים ומספריים, לעשות חתך קטן בווריד התמוטט.
כעת, הכניסו את הצנתר הוורידי כשהשיפוע פונה כלפי מטה, והזיזו אותו בסמיכות לכיוון הווריד הנבוב העליון עד שהוא מגיע לאטריום הימני. באמצעות תפר משי 7-0, הצמידו את הצנתר לכלי. נתחו את רקמות החיבור כדי לחשוף את עורק התרדמה המשותף הנכון.
בסמיכות, הניחו מראש שתי לולאות תפרי משי 7-0 שנשארות לא מהודקות ברמה שבה עורקי התרדמה הפנימיים והחיצוניים מתחלקים. כדי לעצור את זרימת הדם באופן זמני, משוך לולאת תפר שהונחה מראש. לאחר מכן, באמצעות מספריים מיקרו או מחט 27 מד, ליצור פתח קטן על דופן כלי.
יש להחדיר את הצנתר העורקי בסמיכות תוך שחרור לולאת התפר, ולקדם את הצנתר כך שיגיע לקשת אבי העורקים, מבלי לגעת במסתם אבי העורקים. השתמש בשני התפרים שהונחו מראש כדי להדק את הצנתר לכלי. יש להכניע את כל הצנתרים באופן תת עורי, להוציא אותם החוצה בחלק האחורי של הצוואר דרך החתך שנחתך מראש, ולסגור את החתך הגחוני.
חברו את הצנתרים ליציאות הוורידיות או העורקיות של מחבר הצינור מצופה הסיליקון העשוי מצינורות מחט 25 מד. לאחר סגירת החתך הגחוני, הדקו את המחבר תת עורית כאשר העור האחורי אטום בתפרים. באמצעות חוטי ניתוח מנירוסטה, ממלאים את הצנתרים במי מלח הפרינים וסוגרים היטב את קצות הצנתרים.
כדי לחבר את בעל החיים למערכת איסוף דם אוטומטית 24 שעות לאחר הניתוח, חבר את וו הקשירה לטבעת המתכת בעורף וחבר את קו העורק. לאחר חיבור הצנתר העורקי לקו ההזרקה, חברו את הצנתרים הורידיים לקווי הדגימה. הגדר את זמן ההזרקה ואת המינון על 0.5 מיליגרם לק"ג ב 500 מיקרוליטר לדקה.
הגדר את זמן ותדירות דגימת הדם, כולל דילול הדגימה במי מלח. המערכת תחדש באופן אוטומטי כמות שווה של מי מלח כדי להחליף את הדם שנדגם. בצע קדם-הזרקה אוטומטית.
לאחר מכן, לבצע הזרקה אוטומטית תוך ורידי של התרופה clozapine N-oxide בקצב הזרקה של 500 מיקרוליטר לדקה. לאחר מכן בצע דגימת דם לאחר ההזרקה. מוצגים דפוסי הורמון luteinizing בנקבות Kiss1-EYFP בוגרות שקיבלו זריקה סטריאוטקסית חד צדדית של AAV-hM3Dq-mCherry בגרעין arcuate.
רמות הורמון luteinizing Diestrus הן בדרך כלל נמוכות, אבל וריאציות נצפים בדרך כלל בגלל שחרור pulsatile שלה. עלייה חדה ברמות הורמון luteinizing מתרחשת בתגובה הזרקת תחמוצת N clozapine. רוב תאי העצב mCherry שעברו לוקליזציה משותפת עם Kiss1-EYFP הדגימו כי ההפעלה הנגיפית והעצבית היא ספציפית לאוכלוסיית היעד.
מוצג דפוס שחרור פולסטילי של הורמון מחלמן בעכברי בר מסוג diestrus, ואחריו התגובה להזרקת IP של Kisspeptin-10. נצפו פולסים ברורים של הורמון luteinizing האופייני לנקבה בדיסטרוס, והראו רמות נמוכות של הורמון luteinizing בסיסי. עלייה מיידית וחזקה בהורמון luteinizing זוהתה בתגובה למתן Kisspeptin.
