In Vitro Blood-Brain Barrier Model Assembly for Measurement of TEER

כדי להתחיל, לשטוף את החדר העליון של 24 צלחות באר עם PBS. מערבבים את תאי BEND3 עם מדיום DMEM באמצעות מערבל מערבולת כדי ליצור תרחיף. לאחר מכן, זרעו 200 מיקרוליטר של תרחיף תאי BEND3 על קרום PET בחדר העליון של צלחת באר 24.

הוסף 1, 200 מיקרוליטר של מדיום שלם לחדר התחתון של הצלחת כדי לייצב את הלחץ האוסמוטי של החדרים העליונים והתחתונים. שנה את התווך על ידי הסרה איטית של המדיום הישן מצד אחד עם פיפטה בלחץ שלילי והוספת תווך חדש לאורך הקיר במהלך חילופי נוזלים. לפני מדידת TEER, הניחו את הנגד, תמיסת 5% נתרן היפוכלוריט, 75% אתנול ומים מזוקקים פעמיים על שולחן נקי במיוחד.

הפעל את הקרנת UV למשך 30 דקות כדי לחסל חיידקים ופתוגנים שיורית. הכניסו את האלקטרודות לתמיסת 5% נתרן היפוכלוריט עם טלטול איטי למשך שלוש עד חמש שניות. לאחר מכן לטבול באתנול 75% למשך 15 דקות.

לבסוף, מעבירים ל-PBS או למים מזוקקים פעמיים עד לשימוש. לאחר מכן, הפעל את המתג בחלק האחורי של מד נגדי התא. לחץ על בחר צלחת ובחר צלחת 24 באר.

על פי הפעולה, בחר את רצף הזיהוי המתאים. הכנס נגד קילו אוהם לתקע הימני כדי לכייל את המכשיר. אם תוצאת הכיול היא 1000 פלוס מינוס 5 אוהם, שקול את המכשיר מדויק.

אם לא, לחץ על יחידות מצב בממשק הראשי כדי לבחור Ohms ולאחר מכן לחץ על כיול. לאחר מכן, הסר את נגד קילו אוהם והחלף אותו באלקטרודת המדידה באמצעות חוט חיבור. הניחו את האלקטרודה במאונך לתוך לוח 24 הבאר המכיל מדיום בלבד ולחצו על טיפול ריק במכשיר.

ערך הרקע של התנגדות הצלחת ללא תאים יושבים צריך להיות כ 134.4 אוהם. לאחר מכן, הכנס את שתי האלקטרודות לחדרים העליונים והתחתונים של הצלחת היושבת, כך ששכבת התא נמצאת ביניהם. רשום את ערך ההתנגדות על ידי לחיצה עדינה על הדוושה.

ודא שהאלקטרודה אינה נוגעת בתאים בתא העליון ובתחתית התא התחתון. קבל ערכי TEER על-ידי הכפלת ערכי התנגדות חשמלית עם השטח התחתון של התא העליון, כפי שמוצג במשוואה. צייר תרשים קו של TEER לעומת זמן בימים.

כאשר ערך ההתנגדות אינו עולה עם הזמן, התאים יצרו מחסום. ערכי ההתנגדות ששורטטו לעומת הזמן עבור תאי BEND3 הראו כי ערכי TEER של התא החלו להתייצב ביום החמישי.