Extracellular Vesicle (EV) Isolation from Human Urine Samples Using the EVtrap Approach

כדי להתחיל, לאסוף את דגימות השתן מאנשים בריאים. צנטריפוגה 12 מיליליטר דגימה בצינור חרוטי 15 מיליליטר לסילוק פסולת תאים בגופים אפופטוטיים גדולים. לאחר מכן, להעביר 10 מיליליטר של supernatant לתוך צינור טרי 15 מיליליטר.

הוסיפו מיליליטר אחד של חיץ העמסה ו-200 מיקרוליטר של תרחיף חרוזי מלכודת EV לדגימה. דוגרים על הדגימה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות עם סיבוב מקצה לקצה. כדי להוציא את הדגימה, הניחו את הצינור החרוטי בקוטר 15 מיליליטר על מתלה מפריד מגנטי.

הסר בזהירות את הסופרנאטנט והשהה מחדש את החרוזים במיליליטר אחד של חיץ כביסה. לאחר מכן, העבירו את המתלה לצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר ופיפטה עדינה כדי להשהות מחדש את השלפוחית החוץ-תאית או את החרוזים הקשורים לרכב חשמלי. הניחו את צינור המיקרו צנטריפוגה על מדף מפריד מגנטי עבור צינורות 1.5 מיליליטר.

באמצעות פיפטה P200, בזהירות לשאוף את supernatant. כעת, שטפו את החרוזים עם מיליליטר אחד של חיץ כביסה, ואחריו שתי שטיפות עם מיליליטר אחד של PBS בטמפרטורת החדר. לדגור את החרוזים עם 100 מיקרוליטר של טריאתנולמין טרי מוכן 100 מילימולר במשך חמש דקות.

באמצעות מתלה מפריד מגנטי של צינור מיקרו-צנטריפוגה 1.5 מיליליטר, אסוף את התמיסה החמוצה המכילה כלי רכב חשמליים. לאחר שילוב התמיסות החמקמקות, יבשו את האלואיט, באמצעות רכז צנטריפוגות ואקום בארבע מעלות צלזיוס.