כדי להתחיל, הסר את האומנטום האנושי שזה עתה נכרת ממיכל האיסוף בתוך מכסה מנוע זרימה למינרית. לטבול את omentum ב PBS כדי לשטוף בעדינות כל שאריות דם או פסולת. באמצעות אזמל ומלקחיים, לחתוך את הרקמה לחתיכות.
מניחים את חתיכות האומנטום בבארות בודדות של צלחת תרבית בת 24 בארות. ואז למלא את הבארות עם 500 מיקרוליטר של מדיה תרבות omentum. הוסף 10 מיליליטר של PBS סטרילי לבקבוק תרבית המכיל 75% תאי סרטן שחלות אנושיים חיוביים mCherry.
נענעו בעדינות את הבקבוק כדי לשטוף את התאים. הסר את PBS והוסף שלושה מיליליטר של 0.05% טריפסין EDTA. נענעו שוב בעדינות את בקבוק התרבית כדי לפזר טריפסין EDTA באופן שווה על התאים המחוברים.
לאחר מכן מניחים את הבקבוק באינקובטור למשך חמש דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מתחת ל-5% פחמן דו חמצני. לאחר מכן, להסיר את הבקבוק מן האינקובטור. כעת הקש על בקבוק התרבית כדי לנתק לחלוטין את התאים.
לאחר מכן להוסיף שלושה מיליליטר של מדיה תרבית omentum כדי לנטרל את טריפסין. פיפטה את תרחיף התא מספר פעמים כדי לערבב אותו היטב. מעבירים את המתלה לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר.
צנטריפוגה את המתלים ב 1, 200 G במשך חמש דקות ב 24 מעלות צלזיוס. עכשיו פיפטה החוצה את supernatant ו resuspend את גלולת התא בשישה מיליליטר של מדיה תרבית omentum טרי. קח 10 מיקרוליטר של תרחיף התא כדי לספור את התאים באמצעות מונה התא.
לדלל את תרחיף התא עם מדיה תרבית טרייה לצפיפות הנדרשת. עם מזרק של מיליליטר אחד, צייר את ההשעיה של התא הסרטני. חבר מחט 26 מד למזרק.
כעת השתמשו בזוג מלקחיים כירורגיים קטנים כדי להרים חתיכה מהאומנטום החתוך והניחו את חתיכת האומנטום בצלחת סטרילית נפרדת. לאחר מכן להזריק כ -100 מיקרוליטר של השעיית התא הסרטני לתוך הרקמה. לחלופין, ערבבו נפחים שווים של מטריצת קרום מרתף מופשרת עם תרבית אומנטום.
מניחים את התערובת על קרח עד להזרקה. לאחר טבילת חתיכות האומנטום בתערובת המטריצה בבארות צלחת התרבית, דוגרים על הצלחת במשך 20 דקות. לאחר מכן, להסיר את הצלחת מן האינקובטור.
לאחר שהתערובת התמצקה, הזריקו את חתיכות האומנטום עם התאים הסרטניים. לאשר את ההזרקה המוצלחת של התאים הסרטניים באמצעות הדמיה פלואורסצנטית. פס של אות פלואורסצנטי ניתן לראות באתרי ההזרקה כאישור.
כדי להקל על התרבות המשותפת של omentum ותאים סרטניים, להוסיף 500 עד 200 מיקרוליטר של מדיה טרייה כל 48 עד 72 שעות. לבסוף, באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לפקח על הצמיחה של גידולים סרטניים השחלות. צמיחת הגידול עשויה להיראות בעוד שבועיים.
תאי סרטן השחלות שולבו בהצלחה בחתיכות האומנטום ביום ה-14. התאים הסרטניים התפשטו בתחילה על פני השטח של האומנטום בשבוע הראשון. עם הזמן, התאים התאספו ליצירת גידולים.
נטל הגידול אושר על ידי שינוי הצבע של מדיה omentum, אשר הפך מאדום לצהוב.
