Hepatocellular Carcinoma Tissue Dissociation for Organoid Culture

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

156 Views

•

02:03 min

•

August 18th, 2023

DOI :

10.3791/200886-v

August 18th, 2023

•

Cheng-Yang Zhang*¹^,², Xiao-Feng Zhang*³, Jun Yuan*¹^,², Yuan-Feng Gong⁴, Hui Tang⁴, Wan-Yu Guo¹^,², Tong-Yan Li¹^,², Cai-Wen Li¹^,², Yun-Qiang Tang⁴, Ning-Fang Ma¹^,², Ming Liu¹^,²

¹Affiliated Cancer Hospital and Institute of Guangzhou Medical University, ²Guangzhou Municipal and Guangdong Provincial Key Laboratory of Protein Modification and Degradation, Center for Cancer Research and Translational Medicine, School of Basic Medical Sciences, Guangzhou Medical University, ³Department of Pediatric Surgery, Guangzhou Institute of Pediatrics, Guangzhou Women and Children’s Medical Center, Guangzhou Medical University, ⁴Department of Hepatobiliary Surgery, Affiliated Cancer Hospital, Guangzhou Medical University

* These authors contributed equally

Transcript

כדי להתחיל את דיסוציאציה רקמות, לאסוף אחד עד שני סנטימטרים מעוקבים של קרצינומה hepatocellular או רקמת HTC מחולים לא מטופלים. לאחר מכן מניחים את הרקמה בתמיסת שימור הרקמה ושומרים עליה בארבע מעלות צלזיוס עד לעיבוד. כעת, חממו מראש את לוחות תרבית תאי השטח בעלי החיבור הנמוך במיוחד למשך שעה באינקובטור שנקבע על 37 מעלות צלזיוס.

הפשירו את תמצית קרום המרתף למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. בעזרת מספריים כירורגיים, חותכים את רקמת הגידול לחתיכות קטנות על צלחת פטרי בתוך מכסה מנוע זרימה למינרית. מעבירים את החתיכות הללו לתוך צינור חרוטי של 15 מיליליטר ומוסיפים חמישה עד 10 מיליליטר של מדיום בסיסי.

עם פיפטה ברוטרופית, לשטוף דם רב ככל האפשר. הניחו לתערובת לשקוע דקה עד שתיים לפני שתסירו חלק מהסופרנטנט, כולל תאי דם וקרישי שומן צפים. לאחר מכן, צנטריפוגות את התערובת ב 300 גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן חלצו בזהירות את הסופרנאטנט והוסיפו חמישה מיליליטר של תמיסת עיכול מחוממת מראש לרקמה החתוכה. מניחים את הצינור ב 37 מעלות צלזיוס ברוטור לעיכול אופטימלי. לאחר 30 דקות של עיכול ראשוני, השתמש במיקרוסקופ כדי לחפש אשכולות תאים קטנים.

כדי לעצור את העיכול, להוסיף חמישה מיליליטר של מדיום בסיסי קר לצינור. לאחר מכן השתמש במסנן תאים של 100 מיקרומטר כדי לסנן לתוך צינור חדש של 50 מיליליטר. ממלאים את הצינור בתווך בסיסי קר כדי להגיע לנפח כולל של 50 מיליליטר.

לאחר מכן, צנטריפוגו את התאים בשני G במשך 10 דקות בשמונה מעלות צלזיוס. לאחר שתסיים, הסר בזהירות את נוזל העל. השהה מחדש את הגלולה ב -50 מיליליטר של תווך בסיסי קר כדי לקבל את גלולת התא לציפוי אורגנואידים.

Explore More Videos

Hepatocellular Carcinoma

From the series

אופטימיזציה של היווצרות אורגנואיד HCC לזיהוי מטרות ופיתוח תרופות