Paraffin Embedding of a Basic 3D Reconstructed Intestinal Mucosa Model for Immune-Histochemical Staining

להטמעת פרפין של תאים, הגדר את מכונת הפרפין ל 58 מעלות צלזיוס. בעזרת צבת, מעבירים את תוספות הממברנה לבארות נקיות של צלחת סטרילית בת 24 בארות. הוסיפו 500 מיקרוליטר של 37% פורמלין ו-PBS חוצצים מעל המסנן, ומיליליטר אחד מתחת למסנן.

סגרו את המכסה והשאירו את הצלחת במכסה אדים למשך שעתיים. לאחר ניתוק הלמינה פרופריה מהחדרת הממברנה, מעבירים את רירית המעי לתוך המכילה 25 מיליליטר של 35% אתנול, ודגרים במשך 10 דקות. לאחר התייבשות בריכוז אתנול עולה, מניחים את הדגימות ב 50 מיליליטר של קסילן או סוכן ניקוי היסטולוגי במשך 10 עד 20 דקות.

ברגע שהדגימות שקופות, הניחו אותן במחזיק קלטות מתכת וטבלו אותן בפרפין נוזלי בתוך מכונה מחוממת. לאחר 45 דקות, השתמש במיקרוטום כדי לחתוך ארבעה מקטעים מיקרון. מניחים את החלק החתוך על המגלשות ומייבשים אותם בתנור בחום של 18 מעלות למשך 24 שעות.

מודל מקובל של רירית המקבילה למעי בתלת ממד מורכב מתאי Caco-2 שנוצרו בשכבה חד-שכבתית הדוקה וסדירה מעל למינה פרופריה עשירה במטריצה חוץ-תאית. מודלים לא מקובלים כוללים אלה המראים צמיחה מוגזמת, שכבות אפיתל לא מאורגנות, מום או חוסר היווצרות שכבת אפיתל. ההשפעה הפרו-דלקתית של חלבון חיטה עם תכולת גלוטן גבוהה שיבשה את חד-שכבה תאית והפחיתה את עובי שכבת האפיתל בהשוואה לקבוצת הביקורת.

תכולת חלבון האוקלודין הייתה גבוהה משמעותית בקבוצת הביקורת מאשר בקבוצה שנחשפה לחלבון גלוטן. צביעת CD14 ו-CD11b של מונוציטים U937 הראתה כי חלבון חיטה עם תכולת גלוטן גבוהה הפעיל את המונוציטים, וגרם לנדידתם ולהתמיינותם למקרופאגים. תחת אתגר הליפופוליסכרידים, תאי Caco-2 הגבירו את ייצור הריר ואת שחרור הסמן הדלקתי מידקין.