כדי להתחיל, הפשירו את כל הריאגנטים המסופקים בערכת PCR בזמן אמת בטמפרטורת החדר. לאחר ההפשרה, מערבלים בפולסים את הרכיבים במשך 10 שניות במהירות בינונית כדי לערבב אותם. לאחר מכן, צנטריפוגה ב 8, 000G במשך 10 שניות בטמפרטורת החדר.
שמור את הרכיבים המופשרים על בלוק קירור. לאחר מכן, הכינו תערובת PCR לדגימה חיובית ל-HBV, חמישה תקני HBV וללא בקרת תבנית. ערבבו היטב את הריאגנטים הנוספים על ידי פיפטינג עדין שבע עד 10 פעמים, ולאחר מכן מערבולות פולסים, וצנטריפוגה ב 8, 000G במשך 10 שניות בטמפרטורת החדר.
לאחר מכן, פיפטה 15 מיקרוליטר של PCR לערבב לתוך כל צינור PCR. הוסף 15 מיקרוליטר של דגימת DNA שחולצה, חמישה תקני HBV ומים ללא נוקלאז כבקרה ללא תבנית. סגור את צינורות ה- PCR וסובב לזמן קצר בצנטריפוגה.
טען את צינורות ה- PCR במכשיר PCR בזמן אמת. כעת, הפעל את תוכנת המחזור התרמי. בחרו צבעים פלואורסצנטיים ותכנתו את המחזור התרמי ל-PCR בזמן אמת.
לאחר הריצה, נתח את תרשים ההגברה באמצעות סולם ליניארי. הגדר את סף תגובת ה- PCR בתוך השלב המעריכי. שמור על עקביות בהגדרות הסף לקבלת דיוק ויכולת שחזור.
השתמש באותו סף עבור כל הדגימות במכשיר PCR ספציפי. שקול דגימות עם הגברה לפני ערך תקליטור 38 כחיוביות HBV בהתבסס על חיתוך הבדיקה. השתמש בחמישה תקני כימות עבור DNA ספציפי ל- HBV, המכויל כנגד התקן הבינלאומי הרביעי של ארגון הבריאות העולמי ל- HBV DNA.
צור עקומה סטנדרטית עם תקנים אלה כדי לכמת DNA HBV בדגימות לא ידועות. פירוש ערכים עבור דגימות לא ידועות רק אם שיפוע העקומה הסטנדרטי הוא בין מינוס 3.1 למינוס 3.6, הערך הריבועי R הוא בין 0.99 ל- 1.0, יעילות PCR נמצאת בטווח של 90% עד 110% ואין הגברה בבקרה השלילית.
