התחילו בציפוי תאי SHSY 5Y בצלחות זכוכית תחתונות בצפיפות של 15 על 10 קרניים להספק של ארבעה תאים למיליליטר. טפל בתאים עם חומצה רטינואית all-trans ב 1% FBS המכיל מדיום תרבית במשך חמישה ימים, ולאחר מכן טיפול עם גורם נוירוטרופי נגזר המוח במשך יומיים. לאחר מכן, לשטוף את התאים עם PBS סטרילי.
טפל בתאים במשך 72 שעות עם 10 עד 7 אגוניסטים טוחנים RA או איזופורמים באמצעות חלקים שווים של MEM ו- F12 בינוני בשילוב עם 1% FBS. החלף את המדיום במדיום תרבית טרי 1% FBS מעורבב עם TMRM טוחנת 20 ננו למשך 45 דקות. מניחים את התאים באינקובטור המחובר למיקרוסקופ קונפוקלי סורק לייזר המוגדר על 37 מעלות צלזיוס.
צלם את התמונות באמצעות מטרה אפוכרומטית של טבילת שמן 63x. הגדר את גודל התמונה ל- 512 על 512 פיקסלים באמצעות מפתח צמצם של חור סיכה של יחידת שטח אחת. אסוף סדרת זמן של 15 פריימים מחמישה שדות ראייה שונים בכל לוח תא וערימת Z של שמונה מישורי Z במרחקים שווים.
קובץ LSM שנוצר צריך להכיל נתוני זמן, מיקום ומחסנית Z.
