קציר, דה-צלולריזציה ועיכול פפסין של רקמות ריאה של בקר ליצירת מטריצת הידרוג'ל חוץ-תאית ריאתית דה-צלולרית

1 כדי להתחיל, להסיר את רקמות הריאה בקר קפוא2 מ 80 מעלות צלזיוס 3 ולאפשר להם להפשיר בטמפרטורת החדר. 4 לנתח את הרקמה באמצעות אזמלים סטריליים ומספריים 5 כדי להסיר את קנה הנשימה ואת דרכי הנשימה הסחוסיות, 6 ואז להטביע את הרקמה לחתיכות קטנות. 7 שטפו את הרקמה שלוש פעמים 8 במים אולטרה-טהורים 9 המכילים 2%פניצילין וסטרפטומיצין.

10 יש לטבול את דגימת הרקמה הטחונה 11 בתמיסת יוד 2% למשך דקה, 12 ולאחר מכן לבצע שתי שטיפות רצופות 13 במים מזוקקים סטריליים. 14 מעבירים את חתיכות הרקמה לצינור 50 מיליליטר 15 עד לסימן 15 מיליליטר. 16 ממלאים את הצינור עד למעלה במים מזוקקים 17 ומקפיאים בחנקן נוזלי למשך שתי דקות.

18 לאחר מכן העבירו מיד את הצינור לכוס 19 המכילה 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. 20 לאחר חמישה מחזורי הפשרה בהקפאה, 21 דוגרים על הדגימה ב-30 מיליליטר 22 של תמיסת DNase למשך שעה 23 ב-37 מעלות צלזיוס תוך ערבוב מתמיד. 24 הקפיאו את דגימות המטריצה החוץ תאית הרטובה 25 בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.

26 מעבירים דגימות קפואות לליופיליזר 27 ופועלים במצב ייבוש תחת ואקום 28 במשך שלושה עד ארבעה ימים עד לייבוש מלא. 29 לאחר ייבוש בהקפאה, 30 טוחנים את הדגימות לאבקה דקה 31 במכשיר טחינה המכיל קרח יבש. 32 טפלו ברקמות הריאה עם 1%Triton-X-100 33 במשך שלושה ימים תחת סיבוב עדין 34 בארבע מעלות צלזיוס, 35 החליפו את התמיסה כל 24 שעות.

36 לדגור את הדגימה בתמיסת DNase 37 למשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס עם ערבוב מתמיד. 38 לשטוף את הרקמה במים מזוקקים 39 במשך שלושה ימים תחת גלגול קבוע, 40 לחדש את המים כל 24 שעות. 41 לאחר השטיפה האחרונה, בצע ליופיליזציה וכרסום קריו 42 כפי שהודגם קודם לכן.

43 לעכל 15 מיליגרם למיליליטר 44 דגימות מטריצה חוץ-תאית אבקת decellularized 45 במיליגרם אחד לכל מיליליטר תמיסת פפסין 46 בטמפרטורת החדר תחת ערבוב מתמיד במשך 48 שעות. 47 שמור על pH תמיסה בשניים לעיכול יעיל. 48 צנטריפוגה הרקמה לעכל ב 5, 000 גרם במשך 10 דקות 49 ולהסיר את supernatant.