ציפוי אורגנואידים שלמים שמקורם במטופל והגדרת פרמטרי הדמיה להדמיית תאים חיים מרובי תאים חיים

כדי להתחיל, קח צינור עם אורגנואידים שמקורם במטופל או תרחיף PDO בכמות שווה של תמציות קרום מרתף, או BME. בעזרת פיפטה של 20 מיקרוליטר, זרעו חמש כיפות מיקרוליטר במרכז כל באר של צלחת 96 בארות שחוממה מראש. לאחר זריעת כל הבארות, מניחים את המכסה על הצלחת והופכים אותו בעדינות.

דוגרים על הצלחת ההפוכה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות באינקובטור תרביות הרקמה כדי לאפשר לכיפות להתמצק. הפכו את הצלחת כך שהמכסה פונה כלפי מעלה. ואז לדגור שוב.

לאחר הוספת צבעים פלואורסצנטיים ותרופות לצלחות המכילות את PDOs. מניחים את הצלחת בציטוט חמש. הפעל את תוכנת Gen5 ובחלון מנהל המשימות, בחר מצב ידני של imager ולחץ על לכוד כעת.

בהגדרות, ציין את המטרה, המסנן, פורמט המיקרו-צלחת וסוג הכלי, בחר השתמש במכסה והשתמש במהירות נשא איטית יותר ולחץ על אישור. לאחר מכן בחר באר של עניין. בחר את ערוץ brightfield, לחץ על חשיפה אוטומטית והתאם את ההגדרות לפי הצורך.

לצד הגדרת מחסנית Z, הרחב את כרטיסיית מצב ההדמיה, בחר Z stack וכוונן את המיקוד באמצעות חצי התאמת המסלול עד שכל ה- PDO יצאו מהמיקוד. קבעו נקודה זו כתחתית ערימת Z וחזרו על הפעולה לאחור כדי להגדיר את החלק העליון. לאחר מכן, הגדר את התעלות הפלואורסצנטיות על ידי פתיחת שלב ההדמיה לעריכה.

תחת ערוצים, בחרו את מספר הערוצים הרצוי, הקצו ערוץ אחד לשדה הבהיר וערוצים נוספים לכל ערוץ פלואורסצנטי. סגור את החלון על-ידי לחיצה על אישור, שנה את התפריט הנפתח ל- GFP כדי להגדיר את החשיפה עבור הערוץ הפלואורסצנטי הראשון, לחץ על חשיפה אוטומטית והתאם את הגדרות החשיפה תחת הכרטיסיה חשיפה כדי להפחית את אות הרקע. כדי להעתיק הגדרות חשיפה לכרטיסיית מצב תמונה, לחץ על סמל ההעתקה ולאחר מכן לחץ על ערוך שלב הדמיה כדי לפתוח חלון חדש.

בערוץ GFP, לחץ על סמל הלוח בקו החשיפה כדי להוסיף הגדרות תאורה, זמן אינטגרציה ורווח מצלמה לערוץ. כעת לחץ על סמל המצלמה ובחר עיבוד מראש של תמונה תחת שלב עיבוד הוספה. בכרטיסיה brightfield, בטל את הסימון באפשרות החל עיבוד מראש של תמונה.

לכל כרטיסיית ערוץ פלואורסצנטי, ודאו שהאפשרות 'החל עיבוד מקדים של תמונה' מסומנת. בטל את הבחירה, השתמש באותן אפשרויות כמו הערוץ הראשון ולאחר מכן לחץ על אישור כדי לסגור את החלון. כעת לחץ על הקרנת Z תחת שלב עיבוד ההוספה, התאם את טווח הפרוסה במידת הצורך, וסגור את החלון על ידי לחיצה על אישור.

להגדרת הפרוטוקול לדימות קינטית, בסרגל הכלים לחצו על ערכת תמונות, ומהתפריט הנפתח בחרו 'צור ניסוי' מתוך ערכת תמונות זו. לחץ על האפשרויות תחת הכותרת השנייה וסמן את תיבת ההליך הקינטי הלא רציף. תחת זמן כולל משוער, הזן את זמן הריצה של הניסוי.

סגור את החלון על-ידי לחיצה על אישור. בנוסף, הגדר פריסת לוח ושיפוע טמפרטורה בשלב זה. אמת את שלבי הפחתת הנתונים על-ידי לחיצה על החלונות.

לאחר מכן נווט אל קובץ ולחץ על שמור פרוטוקול כמו בסרגל הכלים. בחר מיקום שמירה. הזן שם קובץ ולחץ על שמור.

כדי להתחיל בהדמיה קינטית, טען את הפרוטוקול לתוכנת תזמון bio spa לפי דרישה ובחר משבצת זמינה. בכרטיסיה פרטי הליך, בחר משתמש מהתפריט. לצד חריץ הפרוטוקול, לחץ על בחר ובחר הוסף ערך חדש.

כעת לחץ על בחר לצד חריץ הפרוטוקול. לחץ על פתח כדי לנווט ולייבא את הפרוטוקול לתוכנת התזמון. הזן את זמן ההדמיה הנדרש עבור הצלחת ולחץ על אישור כדי לסגור את החלון.

תחת מרווח, הזן את תדירות ההדמיה הרצויה, בחר לוח זמנים, לוח או כלי כדי להתחיל את רצף אימות הלוחות, לחץ על כן כדי לקבל לוח זמנים זה.