התחל בשמירה על תאי TMPRSS2 HEK-293T ACE2 ב- DMEM המכילים FBS מופעל מחומם, פניצילין וסטרפטומיצין בבקבוק T75. לספירת תאים, ערבבו 20 מיקרוליטר של תרחיף תאים עם 20 מיקרוליטר של תמיסת Trypan Blue. הוסף 20 מיקרוליטר של תרחיף תאים מעורבב צבע לתא ספירת התא, וספור את מספר התאים למיליליטר.
זרע 2.5 כפול 10 בחזקת ארבעה תאי TMPRSS2 HEK-293T ACE2 ב 50 מיקרוליטר של מדיום DMEM שלם לתוך כל באר של צלחת 96 באר. לדגור על התאים באינקובטור פחמן דו חמצני למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. למחרת, להחליף את 50 מיקרוליטר של DMEM עם 50 מיקרוליטר של השעיית וירוס, לדגור במשך 18 שעות ב 37 מעלות צלזיוס.
לאחר הדגירה, מוסיפים 7.5 מיקרוליטר של חיץ ליזה תאי לכל באר, ומערבבים על שייקר מסלול במשך שתי דקות. לאחר שהתאים עוברים ליזה, מוסיפים תמיסת בדיקת לוציפראז גחלילית טרייה, ומערבבים אותם על שייקר אורביטלי למשך דקה אחת. נתח את פעילות luciferase באמצעות קורא microplate לוציפראז מסחרי.
לנטרול בדיקת נוגדנים, זרעו תאי HEK-293T ב -50 מיקרוליטר של DMEM מלא כפי שהודגם בעבר. בצלחת של 96 בארות, מוסיפים שמונה מיקרוליטרים של נוגדן מנטרל 27 BV, ומבצעים דילול סדרתי עם שישה מיקרוליטרים של DMEM ללא סרום. הוסף 54 מיקרוליטר של חלקיק וירוס Ha-CoV-2 לנוגדן המדולל סדרתי, וערבב את התרחיף.
לדגור במשך שעה אחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ב-5% פחמן דו חמצני. לאחר מכן הוסף 50 מיקרוליטר של השעיית וירוס לבארות המכילות תאי HEK-293T. לבקרות, הוסף 50 מיקרוליטר של מדיום DMEM שלם לבארות המכילות תאי HEK-293T בלבד.
מניחים את הצלחת באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 18 שעות. לאחר שכיבת התאים כפי שהודגם קודם לכן, מוסיפים תמיסת בדיקת לוציפראז גחלילית טרייה, ומערבבים על ידי ניעור אורביטלי במשך דקה אחת. נתח את פעילות luciferase באמצעות קורא microplate לוציפראז מסחרי.
הווריאנטים Ha-CoV-2, אומיקרון ואומיקרון הפיקו אות גבוה פי ארבעה עד פי עשרה מאשר ה-Ha-CoV-2 מסוג Wild, מה שמרמז על הדבקה גבוהה יותר. הנוגדן 27 BV הדגים פעילות מנטרלת הן נגד וריאנט דלתא והן נגד וריאנט אומיקרון. ID50 של 27 BV עבור אומיקרון היה בערך פי 10 פחות חזק מאשר ID50 עבור סוג Wild ודלתא.
