כדי להתחיל, הפעל את תוכנת המערכת לניתוח תאים חיים. לחץ על סמל הפלוס בפינה השמאלית העליונה של המסך כדי להפעיל את כלי ההוספה. בחר/י ״סריקה לפי תזמון״ ולאחר מכן בחר/י ״חדש״ כדי להפעיל את תוכנית הסריקה.
בחר רגיל. לאחר מכן קבעו הגדרות סריקה כאפשרויות תא אחר תא על 'ללא' וערוצי תמונה על 'פאזה', 'ירוק' ו'אדום', עם זמני הרכישה המתאימים. הגדר את היעד ל- 20x.
מהרשימה, בחר את הצלחת ובחר את מיקום הכלי כדי להניח את הצלחת על המגש של מערכת ההדמיה. בחר את הבארות המכילות דוגמאות ולהחליט את מספר התמונות ללכוד בכל באר. מידע זה יוצר באופן אוטומטי משך סריקה משוער עבור הצלחת.
לחצו על 'צור מפת לוחות' כדי להזין מידע עבור כל באר, כגון סוג תא ותרכובת. לאחר מכן תן שם למחקר. במסך הבא, בחר מנתח בסיסי כסוג הניתוח ובחר הגדרת ניתוח מהרשימה הנפתחת, המציגה הגדרות ניתוח שהיו בשימוש בעבר.
השאר את הערבוב הספקטרלי עבור ירוק ואדום ב- 0.0. תזמן את הסריקה כך שתתרחש כל 15 עד 20 דקות למשך שמונה שעות. גרור את הפס הלבן והאפור מעל המסך כדי להגדיר את שעת תחילת הסריקה.
במסך הבא, סקור את הגדרות הסריקה ולחץ על הוסף ללוח הזמנים כדי להתחיל בסריקה. לאחר הסריקה, בכרטיסיה תצוגה, פתח את הכלי לניתוח. לחץ על הפעל ניתוח בצד שמאל של המסך ובחר צור הגדרת ניתוח חדשה.
בחרו 'מנתח בסיסי' והשתמשו בערוצי תמונה 'פאזה', 'ירוק', 'אדום' ו'חפיפה'. בחר שש עד שמונה תמונות מדגם מייצגות להדרכה. כדי להגדיר את הגדרת הניתוח, הגדר עצמים ירוקים לנויטרופילים היוצרים מלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים או NETs, ועצמים אדומים לגרעינים של כל הנויטרופילים.
הקש Preview Current או Preview All והתאם כל פרמטר כדי למטב את התוצאות. בחר את זמני הסריקה והבארות לניתוח. לאחר מכן ספק תווית עבור הגדרת הניתוח.
סקור את הסיכום והפעל את הניתוח. לאחר הניתוח, לחץ פעמיים על שם הגדרת הניתוח כדי לפתוח את המחקר המנותח. פתחו את האפשרות 'שכבות' בצד שמאל של המסך ובדקו אם כל תא מסומן כהלכה.
לחץ/י על ״מדדי תרשימים״ בצד שמאל של המסך ולאחר מכן בחר/י ״ספירה לתמונה״ לספירה ירוקה. בחר את נקודות הזמן והבארות שיש לייצא. לקיבוץ נבחר, בחר Plate Map Replicates כדי לוודא שכל הבארות צוינו כהלכה במהלך הסריקה, ולחץ על Export Data.
באופן דומה, יצא את הנתונים לספירה אדומה ולספירת חפיפה. באמצעות המשוואה הנתונה, חשב את אחוז ה- NETs היוצרים תאים עבור כל תנאי ונקודת זמן. מסלול הזמן של היווצרות הרשת מומחש על ידי התוויית אחוז הנויטרופילים יוצרי NET בכל נקודת זמן.
הוספת מעכב AKT חסמה את היווצרות הרשת בנויטרופילים שעוררו באמצעות PMA או סידן יונופור. הדגמת המולקולות הפוטנציאליות המכוונות להיווצרות רשת עשויה להיבדק באופן תפוקה גבוהה באמצעות מתודולוגיה זו.
