פרוטוקול חתך זרעים וטכניקת שיקוע מטריצה לניתוח MALDI-IMS של זרעי דקל קשים

כדי להתחיל, טבלו שלושה זרעי euterpe precatoria ושלושה זרעי Euterpe edulis במים נטולי יונים, למשך 24 שעות. לאחר 24 שעות, הפעל את ההקפאה ותן לטמפרטורה להגיע ל -20 מעלות צלזיוס. הוציאו את הזרעים הרטובים מהמים וחתכו אותם לשניים בעזרת להב מיקרוטומי.

הכינו תמיסת ג'לטין טרייה וחמה, 10%. מניחים מחצית מהזרעים על תבנית, וממלאים אותה בתמיסת הג'לטין. יש להקפיא בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס למשך שעתיים לפני שלוקחים אותו להקפאה.

חבר את הזרע המוטבע לתמיכה בקריוסטט באמצעות תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית, או OCT, והשאר אותו למשך 10 דקות בתוך הקריוסטט להתקשות OCT. לאחר מכן, הוסף סרט הדבקה דו-פרצופי נחושת לשקופית זכוכית מצופה תחמוצת בדיל אינדיום או לשקופית ITO. הפק מקטעים בעובי 20 מיקרומטר מכל מין, והניחו אותם על סרט הדבקה המודבק לשקופית זכוכית ITO.

לשיקוע מטריצה, הניחו את השקופית המכילה פרוסות במייבש ואקום עד שתגיע לטמפרטורת החדר. צור סימני הוראה באמצעות עט תיקון בכל אחת מפינות השקופית, וסרוק את השקופית באמצעות סורק טבלאות. השתמש באיזון אנליטי כדי לשקול 30 מיליגרם של DHB.

לאחר מכן הכינו תמיסה של מיליליטר אחד המכילה חלקים שווים של מתנול וחומצה טריכלורואצטית 0.1%, והמיסו את ה-DHB השקול בתמיסה המוכנה. ממלאים מזרק זכוכית של מיליליטר אחד בתמיסת DHB, ומניחים אותו על משאבת מזרק בקצב זרימה של 0.8 מיליליטר לשעה. באמצעות צינורות פיק, חבר את המזרק ליינון כימי בלחץ אטמוספרי או למחט APCI, ולאחר מכן חבר חנקן למחט.

הגדר את קצב הזרימה ל- 12.5 PSI. חבר את מחט APCI לפלטפורמת התנועה XY. ודא שקצה מחט APCI נמצא ארבעה סנטימטרים מעל המגלשה.

באמצעות תוכנת הציור, הגדר את פלטפורמת התנועה XY לעקוב אחר התבנית, והמתן עד שהפלטפורמה תחזור על התבנית 20 פעמים.