כדי להתחיל בזנב G/I, הכינו תערובת של 20 מיקרוליטר על קרח עם RNA כולל, תערובת חיץ זנב ותערובת אנזימי זנב. לדגור ב 37 מעלות צלזיוס במשך 60 דקות thermocycler. לאחר מכן, הוסף תמיסת עצירת זנב ושמור על קרח במשך שתי דקות.
בצע תמלול הפוך והגברת PCR. לאחר אלקטרופורזה ג'ל ברזולוציה גבוהה של מוצרי PCR, לגשת לנתונים באמצעות התוכנה. פתח את קובץ XAD ובחר שמות לדוגמה או סולם בחלונית Tree View.
הגדל והקטן את התצוגה של אלקטרופרוגרמות ותמונות דמויות ג'ל לקבלת תצוגה מפורטת. כדי להשיג את גדלי השיא, פתח את האלקטרופרוגרמה של מדגם שנבחר. לחץ לחיצה ימנית על אלקטרופרוגרמה ובחר שילוב ידני כדי לבחור פסגות באופן ידני על ידי גרירת הקו האופקי.
התבונן בערכי השיא בטבלת השיא וזהה את הפסגה עם גובה השיא הגדול ביותר. הפעל את סמל הצג/הסתר נקודות קבע בתפריט העליון. פאנל חדש יופיע בצד ימין.
בחר מתקדם, גלול מטה אל בצע ניתוח מריחות ובחר בתיבת הסימון. פעולה זו תוסיף את הטבלה אזור לכרטיסיה אלקטרופרוגרמה. לאחר מכן בחר אלקטרופרוגרמה ועבור לטבלה אזור.
בתפריט From Base Pair ו- To Base Pair, הגדר את זוג הבסיס המתחיל והמסתיים על-ידי לחיצה ימנית על האלקטרופרוגרמה ובחירת אזור להוספה. לחץ לחיצה ימנית על תא כלשהו בטבלת האזורים ובחר שנה אזורים כדי ליצור חלון חדש קטן מוקפץ להגדרת אזורים מותאמים אישית. השתמש במשוואה זו כדי לחשב את אורך הזנב של פולי(A) על mRNA של עניין.
לאחר מכן, בכרטיסיה אלקטרופרוגרמה, סמן את הצג גדלים כדי להמיר באופן אוטומטי את טבלת האזור מזוג בסיסים לזמן ריצה. פתח את קובץ ה- CSV ובחר את הערכים המתקבלים עבור זמן ריצה ליצירת תרשים. באמצעות פרוטוקול זה, אורכי זנב פולי(A) של גנים Dscam1 ו-GAPDH ממוחות זחלי דרוזופילה נותחו, בעוד שתוצרי PCR מזוגות פריימרים ספציפיים לגנים הראו פס יחיד.
תוצרי PCR מזוגות פריימר אוניברסליים ספציפיים לגן הראו דפוסי מריחה ברורים, המצביעים על אורך פולי(A) דיפרנציאלי של mRNA. אורכי הזנב הממוצעים של פולי(A) התקבלו באמצעות ניתוח מריחה. ואת טווח אורכי הזנב היו מיוצגים על ידי electropherograms.
באופן דומה, ניתוח אורך זנב פולי(A) בתאי S2 הראה אורכי זנב דיפרנציאליים של פולי(A) עבור הגנים SV43 prime UTR ו-GAPDH.
