כדי להתחיל, לגדל את טרנספורמנט השמרים שנבחרו בשלושה מיליליטר של מדיום SD URA ב 30 מעלות צלזיוס עד לרוויה הוא הגיע. למדוד את הצפיפות האופטית של התרבית ב 600 ננומטר. צנטריפוגה שני מיליליטר של תרבית לילה ב 14, 000 G בטמפרטורת החדר.
פיפטה החוצה את supernatant. השהה מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של מאגר MES. צנטריפוגה את התערובת ב 14, 000 גרם בטמפרטורת החדר.
לאחר מכן, הסר את supernatant. לאחר שטיפת התאים עם מאגר MES פעם נוספת, השהה מחדש את התאים בשני מיליליטר של מאגר MES. לאחר מכן, יוצקים את כל נפח לתוך מאגר מגיב.
לאחר מכן, הגדר את קורא microplate. נווט אל סמל פרוטוקול הניהול ולאחר מכן הגדר את סוג המדידה לעוצמת פלואורסצנטיות ואת מצב הקריאה לסריקה ספקטרלית. הזן את שם צלחת המיקרו ל- GREINER 96 F BOTTOM והגדר את האופטיקה התחתונה.
גש להגדרות אופטיות על-ידי בחירה באפשרות הגדר סריקה על פני פליטה. התאם את אורך גל העירור ל -433 ננומטר עם רוחב פס עירור של 10 ננומטר. הגדר את טווח אורך גל הפליטה בין 460 ננומטר ל 550 ננומטר עם רוחב פס פליטה של 10 ננומטר ורוחב צעד של ננומטר אחד.
הגדר את זמן ההגדרה ל- 0.1 שניות. כעת, הכינו ריכוזים משתנים של תמיסת נתרן כלורי בבארות של צלחת שחורה תחתונה שקופה היטב 96. טען 150 מיקרוליטר של חיץ MES לתוך שלוש הבארות הראשונות של שורה A.לאחר מכן, פיפטה 150 מיקרוליטר של תמיסת אוסמוליט המתאימה בסדר הולך וגדל משמאל לימין.
עם מיקרופיפטה בעלת 12 ערוצים, פיפטה את תרחיף השמרים השטופים מספר פעמים. לאחר מכן, להעביר 50 מיקרוליטר של תרחיף התא לתוך כל באר. פיפטה את התוכן של כל באר מספר פעמים כדי להבטיח ערבוב אחיד.
מדוד את ספקטרום הפליטה של עוצמת הפלואורסצנטיות באופן מיידי. שימו לב לספקטרום הפליטה הפלואורסצנטי המוצג על המסך. מבני IDR הציגו שילוב של mCerulean3 וספקטרום פליטת סיטרין.
עבור AtLEA45, לחץ היפראוסמוטי גרם לעלייה בעוצמת הפלואורסצנטיות של המקבל עם ירידה בעוצמת הפלואורסצנטיות של התורם. זה לא נצפה במבנה אלבומין.
