הדמיה של מולקולה בודדת של חלבונים עם תווית הילה לחקר אינטראקציות חלבון-עיבוי

1 כדי להתחיל, להשיג תאי כתמי ליגנד2 המבטאים חלבון מתויג הילה של עניין הילה הילה H2B. 3 לאחר הפעלת מערכת המיקרוסקופ, 4 הגדר את פרמטרי הדגירה של התא החי 5 ותן למערכת להתאזן. 6 שים טיפת שמן על 7 יעד TIRF פי 100 במיקרוסקופ 8 והעמיס את דגימת התא על שלב המיקרוסקופ.

9 כדי לזהות תא בריא מורפולוגית, 10 כוונן את מיקום Z 11 וצלם את דגימת התא תחת תאורת שדה בהיר. 12 חתוך את שדה הראייה כדי ללכוד את גרעין תא היעד. 13 באמצעות תאורת לייזר, כוונן את זווית TIRF 14 כדי להשיג תאורת Hilo עם יחס אות לרעש אופטימלי של 15 של מולקולה בודדת.

16 לאחר מכן, הגדר את זמן החשיפה ל- 500 אלפיות השנייה. 17 במהלך הזמן המת בין פריימים, 18 תמונות מפעילות את המולקולות 19 עם קרן של 111 מיקרוואט 405 ננומטר, 20 ובמהלך כל חשיפה, מעוררות מולקולות הילה H2B 21 עם קרן של 9.1 מיליוואט 640 ננומטר. 22 התחל צילום תמונה עבור 2000 פריימים ברציפות 23 והגדל בהדרגה את עוצמת הקרן בגודל 405 ננומטר 24 עם הפחתת המולקולות המופעלות בצילום.

25 עבור חלבון מעניין המתויג בהילה, 26 אורכי גל פליטה מפוצלים בין שתי מצלמות 27 באמצעות מראה דיכרואית בעלת מעבר ארוך. 28 לאותם פרמטרי רכישה שהודגמו קודם לכן, 29 הוסף ערוץ JFX549 כדי לרכוש פריים אחד כל 10 שניות 30 וללכוד 2000 פריימים ברציפות.