השתלת אורגנואיד במוח האנושי בקרום כוריאואלנטואי עוברי אפרוח למידול נוירו-וסקולרי

להתחיל להפיק אורגנואידים במוח מתאי גזע עובריים H9 ולקבל ביצי תרנגולות שהופרו לאחרונה. ביום הראשון, נקו את משטח קליפת הביצה עם 70% אתנול ותנו לו להתייבש. מניחים תחבושת דבק נייר כירורגי על גבי הביצה.

בעזרת מנורה, מנטרלים את משטח קליפת הביצה הדק ביותר בקצה העליון. לאחר מכן בעזרת מחט סטרילית, נקבו בעדינות את קליפת הביצה כדי ליצור חור בתא האוויר מבלי להפריע למצלמת האפרוחים. כדי להגן על העובר מפני הסביבה החיצונית, כסו את חור תא האוויר בתחבושת חדשה ודגרו על הביצית בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס.

ביום השביעי, הסירו את התחבושת ונגבו את משטח קליפת הביצה באתנול 70%. לאחר מכן הניחו תחבושת חדשה וגדולה יותר המכסה את הרחבה. נקבו בעדינות את קליפת הביצה כדי להגדיל את החור לחלון השתלה בקוטר שני סנטימטרים.

בעזרת פינצטה, הסירו את שולי חלון קליפת הביצה וקילפו את התחבושת כדי להסיר את חתיכות האבק וקליפות הביצים שנותרו. באמצעות קצה מד סטרילי רחב, לאסוף את האורגנואיד ב 50 מיקרוליטר של PBS ולהעביר אותו בזהירות למצלמה מול המיקום של העובר. מוסיפים טיפה של שבעה מיקרוליטר של ג'ל גפרורים מסביב לאורגנואיד.

אוטמים את החלון באמצעות פרפילם ומחברים אותו למעטפת בעזרת תחבושת דבק. לדגור על ההשתלה לצורך בידול פקה. לאחר חמישה ימים, הסירו את תחבושת הדבק.

בעזרת מספריים ופינצטה עדינה, הגדילו את החלון כדי להקל על קציר הדגימות. תקן אותו עם 4% paraformaldehyde במשך שתי דקות, ולאסוף קטע 1.5 סנטימטר מרובע של המצלמה המכיל את אורגנואיד. כדי לאשר השתלה מוצלחת, לבצע hematoxilin ו eosin צביעה של 20 מיקרומטר עבה פרוסות של פקה עם organoid.

צביעת המטוקסילין ואאוזין ברקמת השתל הצביעה על כך שהאורגנואידים המשיכו להבשיל ליד כלי הדם ללא כל עדות לחדירת כלי דם.