כדי להתחיל ציפוי אנטיגן, לדלל ovalbumin לחמישה מיקרוגרם למיליליטר עם חיץ ציפוי. מצפים צלחת ELISA 96 באר עם 100 מיקרוליטר של תמיסת ovalbumin לכל באר לילה בארבע מעלות צלזיוס. למחרת, לשטוף את הבארות חמש פעמים עם PBST.
לחסום את הבארות עם 250 מיקרוליטר של 1% BSA PBST ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעתיים. להכנת דילול של 1000 X בסרום, יש לדלל תחילה 20 מיקרוליטר של סרום למיליליטר אחד באמצעות PBST BSA 0.5%. לאחר מכן להסיר 25 מיקרוליטר של aliquot בסרום ולדלל אותו ל 500 מיקרוליטר באמצעות 0.5% BSA PBST.
מוסיפים 200 מיקרוליטר של סרום מדולל ל 1000 X לשורה הראשונה של הצלחת המצופה. לאחר מכן הוסף 100 מיקרוליטר של PBST 0.5% BSA לכל הבארות למעט הבארות בשורה הראשונה. מעבירים 100 מיקרוליטר מהשורה הראשונה לשורה השנייה, ומערבבים 10 פעמים.
כדי ליצור ריכוזים משתנים של סרום לזיהוי IgG, יש להשליך 100 מיקרוליטר נוזל מהשורה האחרונה. לאחר מכן, לדלל עכברים שטיפה בנרתיק, שטיפת נאדיות הסמפונות, נוזלי שטיפת אף עם PBST 0.5% BSA ונוזל שטיפה במעי דק עם PBST בסרום עגל עוברי 20%. דוגרים על הצלחת בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה.
לשטוף את הבארות חמש פעמים עם PBST. הוסף 100 מיקרוליטר של נוגדן עז מצומד נגד עכבר HRP לבארות המתאימות ודגר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות. לאחר שטיפת הבארות חמש פעמים עם PBST, להוסיף 100 מיקרוליטר של מצע TMB ELISA ולדגור באזור מוגן אור במשך חמש דקות.
הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת עצירה של 450 ננומטר כדי לסיים את התגובה. מדוד את הספיגה ב 450 ננומטר על קורא microplate. חשב את טיטר הנוגדנים המגדיר ערך תגובה חיובית כפי 2.1 מערך הסרום של קבוצת עכברי הביקורת.
החיסון האדג'ובנטי ננו-אמולסיה הגדיל משמעותית את טיטר הנוגדנים IgG, IgG1 ו-IgG2a הספציפיים לאובאלבומין בסרום. רמות IgA ספציפיות בנוזל שטיפת הנרתיק ובנוזל שטיפת המעי הדק השתפרו באופן משמעותי כאשר אובלבומין היה אדג'ובנט עם חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב.
