הליך ציטומטריית זרימה למדידת pH יחסי של הגליקוזום בטריפנוזומה ברוסי חי

כדי להתחיל, הפעל את תוכנת ציטומטר הזרימה. פתח ניסוי חדש. הוסף את מספר הדוגמאות הרצוי ותן להן שם.

לאחר מכן הגדר היסטוגרמה של ערוץ YL2-H או RL1-H, אזור פיזור קדימה לעומת תרשים נקודות של אזור פיזור צדדי, אזור פיזור קדימה לעומת התוויית נקודות בגובה פיזור קדימה והתוויית נקודות BL1-H לעומת VL2-H. הניחו את תאי הבקרה של Trypanosoma brucei מסוג פרא לא מוכתמים על פתח הזרקת הדגימה, והתאימו את מיקום הבמה. כדי להקטין את הקובץ, בטל את הסימון של הערוצים שאינם מיועדים להקלטה.

התחל בקצב זרימה נמוך כדי לאפשר התאמות. לאחר מכן לחץ על הפעל כדי להתחיל ברכישת נתונים. כוונן את מתח YL2 או RL1 כדי ליישר את השיא הראשי בטווח של 10 עד השלישי עד 10 ליחידות עוצמת הפלואורסצנטיות היחסית הרביעית.

התאם את מתחי הפיזור קדימה ואת מתחי הפיזור הצידי כדי להבטיח שיותר מ- 90% מהאירועים יהיו בטווח התוויית הנקודות. הגדר את סף הפיזור קדימה כדי לא לכלול פסולת מבלי להשמיט תאים בני קיימא. שנה את הגדרות הערוצים VL 2 ו- BL 1 כדי למקם את השיא העיקרי של בקרת סוג הבר הבלתי מוכתם בטווח של 10 לשתיים עד 10 ליחידות עוצמת הפלואורסצנטיות היחסית הרביעית.

לחץ על הקלט ומדוד לפחות 10,000 אירועים. לאחר מכן הניחו את דגימת הטריפנוזומה הראשונה המבטאת pHluorin המושרה מוכתמת בפרופידיום יודיד או תיאזול אדום על פתח הזרקת הדגימה. שוב, התחל באיסוף נתונים בקצב זרימה נמוך לאחר ביצוע השטיפה.

נטר כל חלקה כדי לוודא שיותר מ -90% מהאירועים נלכדים כראוי ושערוצי VL2-H ו- BL1-H אינם רוויים. שמור את הנתונים מכל מדגם בפורמט קובץ FCS והתכונן לניתוח.