בידוד RNA כולל מרקמת שומן חומה Supraclavicular לניתוח ביטוי גנים

1 לאחר ניתוח scBAT2 מהעכבר שעבר המתת חסד, 3 הכניסו מיד את הרקמה לצינור מיקרו-צנטריפוגה. 4 תקעו חור בחלק העליון של הצינור עם מחט סטרילית 5 והקפיאו בחנקן נוזלי. 6 משרים גרגיר ומרית דקה בחנקן נוזלי.

7 יוצקים את דגימת הרקמה הקפואה 8 מצינור מיקרו צנטריפוגה לתוך המליטה. 9 מוסיפים כמות קטנה של חנקן נוזלי למכתש 10 וטוחנים היטב את הרקמה עם המזיק 11 עד לריסוק מלא. 12 השתמש במרית הדקה כדי לגרד ולהעביר 13 את הרקמה המרוסקת בחזרה לצינור הצנטריפוגה הזעיר.

14 לאחר שכל הרקמה מועברת, 15 מוסיפים 500 מיקרוליטר של תמיסת בידוד RNA לצינור 16 וסוניקטים למשך 30 שניות באמצעות מנוע כדורי. 17 לאחר מכן, השתמש במזרק כדי לקשט למעלה ולמטה 10 פעמים 18 כדי להוסיף כינים לרקמה, 19 להבטיח שלא נראים חלקיקים מוצקים. 20 מוסיפים 250 מיקרוליטר כלורופורם ומערבולת מדי פעם 21 במהלך חמש דקות, דגירה בטמפרטורת החדר.

22 צנטריפוגה הדגימות ב 21, 000 גרם במשך 20 דקות 23 בארבע מעלות צלזיוס. 24 מעבירים את השכבה המימית העליונה לצינור חדש 25 ומוסיפים כמות שווה ערך של 70% אתנול. 26 מעבירים 500 מיקרוליטר של הליזט 27 לעמוד קשירה.

28 צנטריפוגה ב 18, 000 גרם במשך 60 שניות 29 ולהשליך את התסנין. 30 לשעתוק לאחור, הוסף 0.5 למיקרוגרם אחד 31 של RNA מדולל במים מטופלים DEPC לרצועת צינור PCR. 32 לאחר מכן לדלל את CDNA ל 250 ננוגרם למיקרוליטר 33 באמצעות מים מטופלים DEPC ולהגדיר PCR כמותי.

34 רמות הביטוי של גנים סמנים שהיו מעורבים 35 בתיווך תפקוד scBAT היו דומות יחסית 36 בין scBAT לעטלף בין-סקפולרי.