כדי להתחיל, הוסף צבע כתום 500x לפתרון PBS כדי להשיג יחסי צבע שונים, הפעל את תוכנת רכישת הנתונים על שולחן העבודה. לחץ על מכשיר, ולאחר מכן בחר את דגם המיקרו-צלחת המתאים ובחר אישור. לחץ על הגדרות הרכישה ובחר פלואורסצנס.
תחת ממשק אורך הגל, הגדר את הלמדא אחד ל 470 ננומטר ו 570 ננומטר, ולאחר מכן לחץ על אישור. פיפטה 100 מיקרוליטר מכל ריכוז של צבע כתום לתוך בארות של צלחת באר 96. הניחו את הצלחת בשלב הזיהוי של מכשיר קורא המיקרו-לוחות הפלואורסצנטיים.
לחץ על סמל הקריאה בתוכנה, ומדוד את הפלואורסצנטיות של ריכוז כל צבע 13 פעמים בטמפרטורת החדר עם מרווח של שתי דקות. לאחר כל קביעה, לחץ על סמל הייצוא, ולאחר מכן בחר יצא ל- XML XLS TXT. בחר כל הצלחות.
לאחר מכן בחר צלחת בפורמט הפלט ולחץ על בסדר כדי לשמור את הנתונים בפורמט XLS לניתוח נוסף. כעת, הפעל את החימום הדיגיטלי רועד אמבטיה יבשה. כוונו את טמפרטורת החימום ל-35 מעלות צלזיוס, ואת זמן החימום לשתי דקות.
הכינו את יחס הדילול האופטימלי של הצבע בצינור מיקרו צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר. לאחר מכן הניחו אותו באמבט החימום הדיגיטלי, הרועד, היבש למשך שתי דקות. עכשיו, להוסיף 100 מיקרוליטר של שני PBS, ואת פתרונות צביעה לבארות של הצלחת.
הכניסו את הצלחת לשלב הזיהוי של המכשיר. לחץ על סמל קריאה בתוכנת Data Acquisition. כוונו את טמפרטורת החימום ל-40 מעלות צלזיוס, ואת זמן החימום לשתי דקות.
כעת, פיפטה את תמיסת הצבע בצלחת בחזרה לתוך צינור מיקרו צנטריפוגה 1.5 מיליליטר. מחממים אותו בחימום דיגיטלי רועד אמבטיה יבשה במשך שתי דקות. חזור על הוספת תמיסות הצבע, וייצא את הנתונים המתקבלים כדי לבדוק את ספיגת תמיסת הצבע בהפרשי טמפרטורה של חמש מעלות מ- 35 ל- 95 מעלות צלזיוס.
שלב תמיסת חלבון CD40 עם PBS כדי לקבל ריכוזים סופיים של 5, 10, 15 ו -20 מיקרוגרם למיקרוליטר. לאחר מכן, לשלב צבע כתום עם PBS כדי לקבל ריכוז סופי של אחד הוא 500. להעריך את הספיגה של תמיסת חלבון CD40 בחמש מעלות טמפרטורה מ 35 עד 95 מעלות צלזיוס.
שמור את הנתונים כקובצי XLS ולאחר מכן חשב את נקודת ההתכה, או את ערך המדיטציה הטרנסנדנטלית באמצעות התוכנה Data Analysis. לאחר מכן, ערבבו CD40 ו- Umbelliferone לפתרון PBS. לאחר מכן פיפטה את הצבע הכתום לתוך PBS כדי לקבל ריכוז תמיסה של אחד הוא 500.
מדוד את הספיגה של תמיסת מתחמי CD40 Umbelliferone בהפרשי טמפרטורה של חמש מעלות מ 35 עד 95 מעלות צלזיוס. הצבע הכתום הפגין באופן עקבי עירור פלואורסצנטי יציב הן בטמפרטורת החדר, והן בטמפרטורות גבוהות. נקבע יחס דילול אופטימלי של אחד הוא ל 500.
ערך TM יציב של 51.82 מעלות צלזיוס זוהה בריכוז של 15 מיקרוגרם למיליליטר, אשר ירד ל 45.79 מעלות צלזיוס עם עלייה בריכוז חלבון CD40.
