כדי להתחיל, הניחו את כל החומרים הדרושים לגידול תאי HEK 293 במכסה המנוע הנקי לבטיחות ביולוגית. לאחר הפשרת העברת HEK 293 תרחיף תאים מהבקבוקון לתא תרחיף מחומם מראש 30 מיליליטר בצינור 50 מיליליטר. דוגרים על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 80% לחות, 8% פחמן דו חמצני ו-200 סל"ד למשך שלושה עד ארבעה ימים.
הוסיפו 100 מיקרוליטר של תרחיף תאים ל-400 מיקרוליטר של 0.4% Trypan Blue Solution והפכו בעדינות את הצינורית כדי לערבב. מניחים 50 מיקרוליטר של תרחיף התאים המטופלים Trypan Blue על שקופית ההמוציטומטר, סופרים את סך כל התאים בני קיימא ומחשבים את הכמות הנדרשת של תרחיף תאים לצורך העברה. הוסף את הכמות הנדרשת של תרחיף תאים לתא תרחיף טרום חם ודגירה ב 37 מעלות צלזיוס עם 8% פחמן דו חמצני.
הוסף 1 מיליון תאים למיליליטר HEK 293 תרחיף תאים ב 300 מיליליטר של תווך תא תרחיף ודגור ב 37 מעלות צלזיוס עם 8% פחמן דו חמצני. ביום השני, חממו את מדיום תא התרחיף, הפלסמידים וריאגנט הטרנספקציה לטמפרטורת החדר. מוסיפים פלסמידים למדיום המוכן ולמערבולת לזמן קצר, ואז מוסיפים מגיב טרנספקציה ומערבולת שוב לזמן קצר, לפני הדגירה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
במהלך הדגירה של תערובת הטרנספקציה, ספרו את התאים שגודלו בתרבית ביום הראשון ובמידת הצורך, התאימו את צפיפות התאים בין שניים ל-2.5 מיליון תאים למיליליטר. לאחר 30 דקות, טיפתית, להוסיף את תערובת transfection לתאים תוך ערבול עדין של הצינור, לדגור במשך 72 עד 96 שעות. ביום החמישי, הוסיפו 33 מיליליטר של חיץ ליזיס תאי 10x לתאים וערבבו על ידי ניעור עדין.
לדגור על המתלה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 1.5 שעות עם רעיד. צנטריפוגה את תרחיף התא ב 3, 428 G בארבע מעלות צלזיוס במשך 60 דקות. סננו את הסופרנאטנט דרך מסנן ואקום PES של 0.45 מיקרון ואספו את הליזט המזוקק במיכל המסנן.
הוסף 90 מיליליטר של תמיסת 40% PEG 8, 000 ל- 360 מיליליטר של ליזט תאים מסונן. הוסיפו לתא ליזט 70% אתנול מעוקר וערבבו במהירות 300 סל"ד על קרח או בחדר קר במשך שעה, ואז דגרו במשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס מבלי לערבב.
