הרחבה דו-ממדית, גירוי דו-ממדי והבשלה אורגנואידית תלת-ממדית של פיברובלסטים עוריים אנושיים רגילים למבוגרים לצורך מחקר והנדסה של גידים

כדי להתחיל, צנטריפוגה טריפסינזציה פיברובלסטים עוריים אנושיים נורמליים. הסר את supernatant מן הצינור הצנטריפוגה. מוסיפים לגלולה תוספת DMEM שחוממה מראש עם גלוקוז נמוך, ומערבבים היטב כדי להשהות אותה מחדש.

צלחת את הפיברובלסטים העוריים האנושיים הרגילים בצלחת תרבית תאים דבקה של 10 סנטימטרים. נענעו בעדינות את המנה בצורה צולבת. לאחר 14 יום של גירוי דו-ממדי, כאשר התאים הפכו למשתלבים, שאפו מדיום, והשתמשו במגרד תאים כדי לנתק בעדינות ובמהירות את יריעת התאים שנוצרה מהצלחת.

בו-זמנית, גלגלו את גיליון התא לאורגנואיד דמוי מוט תלת-ממדי. מעבירים את אורגנואידי הפיברובלסטים העוריים האנושיים הרגילים לצלחת פטרי לא דבקה ברוחב 10 סנטימטרים. מדוד את ההתארכות בעזרת סרגל.

לאחר מכן החזיקו צד אחד של האורגנואיד עם טוויטר, ומתחו בעדינות את האורגנואיד עד שהוא מוארך באופן אקסיאלי בכ-10% באמצעות טוויטר, לחצו ידנית את פיני המתכת דרך שני הקצוות של האורגנואיד לתוך צלחת הפלסטיק כדי לקבע אותו. לבסוף, להבשלה תלת-ממדית, הוסף 10 מיליליטר של מדיום DMEM מחומם מראש עם גלוקוז גבוה לפני הדגירה. המורפולוגיה הגסה של אורגנואידים תלת-ממדיים בימים אפס ו-14 של שלב ההתבגרות התלת-ממדית הראתה מראה לבן ובוהק.

עם הזמן, האורגנואידים התכווצו ונראו צפופים יותר. המורפולוגיה של האורגנואידים הוערכה באמצעות צביעת H E. ביום הראשון, האורגנואידים הראו שכבות מנותקות, המורכבות בעיקר מתאים המוקפים בכמויות נמוכות של מטריצה.

התאים בתוך השכבות הציגו גרעינים בעלי צורה עגולה וגדלים משתנים. ביום ה -14 נצפתה עלייה ניכרת באות האוזין, שהצביע על תצהיר מטריצה ושכבות מאוחות. יתר על כן, האורגנואידים הראו נוכחות של אזורים המכילים תאים מיושרים.

רוב הגרעינים היו בעלי גדלים דומים, ולעיתים היו מוארכים.