כדי להתחיל, הנח את העכבר בהמתת חסד על לוח הנתיחה. באמצעות סיכות T דיסקציה מאבטחים את כריות כף הרגל של העכבר ללוח. בעזרת מספריים לדיסקציה כירורגית, חותכים את הבטן התחתונה וחותכים עד הסנטר.
לאחר הפרדת העור מרירית הצפק, מתחו אותו בניצב הרחק מתא המטען והצמידו אותו למטה. באמצעות מלקחיים קהים, להסיר בזהירות בלוטות לימפה צוואריות, ציריות, ברכיאליות ומפשעתיות, כמו גם את הטחול ולהניח אותם במסננת תאים 70 מיקרומטר המכילה שני מיליליטר של מדיום R9. כדי להכין מתלה תא בודד, סובב את כלי שיבוש הרקמה חצי סיבוב בכיוון השעון ונגד כיוון השעון שוב ושוב.
לשטוף את המסננת עם חמישה מיליליטר של מדיה. לאחר מכן, להעביר את תרחיף התא לצינור חרוטי 15 מיליליטר ולצנטריפוגה אותו. לאחר פירוק הסופרנטנט, הוסיפו 500 מיקרוליטר של חיץ שוכב לצינור כדי להסיר תאי דם אדומים.
לאחר דקה אחת, מערבבים את התאים עם 9.5 מיליליטר של מדיום R9. צנטריפוגה את הצינור. ודקנט את הסופרנאטנט ביסודיות.
לאחר מכן, להשעות מחדש את גלולת התא ב -10 מיליליטר של מדיום ברירה שלילית המכיל נוגדנים נגד MHC2 ו- CD4, ומניחים את הצינור בנדנדה למשך 30 דקות. לאחר הטלת התאים ב 270G במשך חמש דקות, decant supernatant. בו זמנית בצינור חרוטי 15 מיליליטר, לשטוף 200 מיקרוליטר של כבשים נגד חולדות ואימונוגלובולין G חרוזים בשבעה מיליליטר מדיום.
מניחים את הצינור על מגנט, ומסירים את המדיום. לאחר שטיפה פעמיים נוספות, להשהות מחדש את החרוזים בשבעה מיליליטר של מדיום R9. לאחר מכן, מערבבים שבעה מיליליטר של תרחיף החרוזים עם גלולת התא ודגרים על הצינור על נדנדה.
כדי להסיר תאים הקשורים לחרוזי נוגדנים, הניחו את הצינור החרוטי ישירות על המגנט למשך שלוש דקות. שאפו את תרחיף התא לתוך צינור חדש של 15 מיליליטר, תוך שמירה על הצינור על המגנט. מטילים את התאים החיוביים המועשרים ב-CD8, ושוטפים שלוש פעמים במדיום.
