מעקב אחר נדידת תאי T פעילים שבודדו מרקמת לימפה משנית של עכבר

כדי להתחיל, בצע הדמיה בהילוך מהיר של לימפוציטים חיים מסוג T שבודדו מרקמות לימפה משניות של מורין. לניתוח העברת תאי T, פתח את תוכנת Velocity וצור רצף תמונות חדש. בחר והזז סרטי מיקרוסקופיית וידאו בהילוך של כל הזמנים לאזור הכחול ב- Velocity.

באמצעות הכלי לשיפור הניגודיות, שנה את הבהירות והניגודיות ולאחר מכן התאם את גדלי התמונה ל- 0.325 מיקרומטר עבור 20x ו- 0.65 מיקרומטר להגדלה של פי 10. לאחר הגדרת הרצף להגדרת נקודות זמן, עבור לכרטיסייה מדידה ובטל את הסימון של כל נקודות הזמן. לאחר מכן, מצא אובייקטים באמצעות עוצמה והחלק את הסרגל מימין לפסגה.

כדי למנוע פסולת תאים, להוציא את כל התאים קטנים מ -10 מיקרומטר וקוטר גדול מ -100 מיקרומטר. סמן את התעלם מאובייקטים סטטיים ולאחר מכן הצטרף אוטומטית לרצועות מנותקות. כדי לשמור פרוטוקול חדש, עבור אל מדידות.

לחץ על שמור פרוטוקול ולאחר מכן תן שם לפרוטוקול חדש. בלשונית המדידה לחצו על מדדו את כל נקודות הזמן ומיינו מסלולים לפי טווח זמן מגבוה לנמוך. לאחר הקלטת מספרי מזהה המסלול עבור התאים עם רצועות טובות, ייצא את הקובץ כטקסט מופרד באמצעות פסיקים והעבר נתונים לתוכנת הניתוח הרצויה.

כדי לבצע מעקב ידני, פתח את תמונה J, עבור אל תוספים ובחר מעקב ומעקב ידני. הגדר את מרווחי הזמן X by Y כיול, גודל פיקסלים וכיול Z. לאחר מכן, לחץ על הוסף מסלול כדי להתחיל מעקב אחר תאים בודדים.

בחר תא אחד בנקודת הזמן הראשונה והמשך אותו לאורך כל נקודות הזמן. לבסוף, לחץ על מסלול הקצה. מעקב אחר תאים בסיוע תוכנה, אפיין התנהגויות נדידה של תאי T בודדים מופעלים כפי שמסומנים על ידי קווים בצבעים שונים.