לפני חיבור הצינור המעוקר לביו-שבב, שטפו תחילה את הצינור עם 200 מיקרוליטר של PBS ואחריו 200 מיקרוליטר של מדיום EC. לאחר שטיפת החדר העליון והתחתון עם מדיום תרבית תאים טרי, הכנס את המאגר בצד היציאה של השבב הביולוגי וחבר את המאגר עם הצינור לכניסת השבב הביולוגי. לקבלת שפע בינוני מעגלי, לחבר את הצינור למאגר ואת biochip.
עכשיו למלא את המאגר עם 500 מיקרוליטר של מדיום EC. חבר את השבב הביולוגי עם הצינור כדי להתחיל בשפע בקצב זרימה של 21 מיקרוליטר לדקה. למחרת, עצרו את השפע ורוקנו את המאגרים.
מתחת לארון בטיחות סטרילי, פיפטה 500 מיקרוליטר של מדיום EC לתוך המאגרים ולשטוף בעדינות את התא התחתון עם 200 מיקרוליטר של סל"ד פלוס בינוני. לאחר מכן הפעל מחדש את הזילוח בקצב זרימה של 21 מיקרוליטר לדקה. כדי ליצור ממשק נוזלי אוויר מהיום ה-12 עד היום ה-14, פתחו את התקעים בתא התחתון וספגו בזהירות את המדיום עד להופעת בועת אוויר.
לאחר הבטחת הסרת כל הנוזלים מהתעלה והחדר, סגור בזהירות את היציאות, מלא את המאגר בתווך EC וסקולרי טרי מוכן והמשך בתרבית השפע רק בחדר העליון עד היום ה -14. נתק את השבבים הביולוגיים ממערכת הזרימה. לאחר הסרת הצינור, בדקו את שכבות התא מהשבב הביולוגי תחת מיקרוסקופ למפגש תאים.
שטפו את חללי הביו-שבבים עם PBS כדי להסיר את מדיום תרבית התא. הוסף 300 מיקרוליטר של תמיסת 4% paraformaldehyde ב- PBS לתא העליון ו- 200 מיקרוליטר לתא התחתון. לאחר 10 דקות של דגירה, לשטוף את החדר שלוש פעמים עם PBS.
לחדירה, יש להוסיף 300 מיקרוליטר של 0.25% טריטון X 100 ב-PBS ולדגור במשך 30 דקות, לאחר שטיפה עם PBS, פיפטה 300 מיקרוליטר של אלבומין 3% בסרום בקר ב-PBS בשני התאים ולדגור במשך שעה. עבור צביעה אימונופלואורסצנטית, הכינו 50 מיקרוליטר של תמיסות נוגדנים באמצעות 3%BSA לכל ממברנה באמצעות יחסי דילול מתאימים. כדי לגשת לתאים בתוך השבב, בצע חתך מדויק לאורך החלק החיצוני של החלל והסר את רדיד המליטה.
בעזרת אזמל, חותכים את הממברנה החוצה על ידי הסרת הקצוות האטומים לשבב הביולוגי. לאחר חלוקת הממברנה לשתי חתיכות, אוספים את חתיכות הממברנה בפינצטה ומניחים אותן על שקופית מיקרוסקופית להכתמה, מוסיפים 50 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים לכל פיסת ממברנה ודגרים לילה בארבע מעלות צלזיוס, הגנה מפני אור. לאחר שטיפת הממברנה שלוש פעמים עם PBS, הוסף טיפה של אמצעי הרכבה על השקופית המסומנת ומקם את הקרום המתאים.
מוסיפים טיפה ממדיום ההרכבה על החלק העליון של הממברנה, ומניחים כיסוי. צביעה אימונופלואורסצנטית של תאי אנדותל של וריד הטבור האנושי חשפה שינויים מורפולוגיים וביטוי מרקופרוטאין לאחר 14 יום של תרבית משותפת. בצד כלי הדם V ביטוי קוהרנטי בגבולות תאי אנדותל הציע מפגש והיווצרות מחסום אנדותל.
צד האפיתל הוערך עבור אקאהרין וחלבון פעילי שטח ביטוי המציין שלמות אפיתל מכתשית ותפקוד.
