כדי להתחיל, להעביר חמישה מיליליטר של supernatant תרבית acidified של pseudomonas aeruginosa לתוך צינור פוליפרופילן 50 מיליליטר. הוסף חמישה מיליליטר של תערובת מתנול כלורופורם לתוך צינור זה. הפוך את הצינור שלוש פעמים במשך 30 שניות כדי להתסיס ולערבב את התמיסה.
השאירו את הצינור ללא היפוך למשך שתי דקות בין כל תסיסה. צנטריפוגה את הצינור במשך 10 דקות ב 3000 G בארבע מעלות צלזיוס, ולאחר מכן להעביר את הפאזה האורגנית לתוך צינור נקי. השאירו את הצינור במכסה מנוע עד לייבושו.
לאחר מכן, השתמש פיפטה 10 מיקרוליטר כדי להחיל חמישה מיקרוליטר של הדגימות על צלחת TLC. כדי להכין את השלב הנוזלי, מערבבים 26 מיליליטר כלורופורם, שישה מיליליטר מתנול ו-0.8 מיליליטר של 20% חומצה אצטית. מניחים את תערובת הממס בתא TLC סגור למשך 10 דקות לפחות כדי להרוות אותו.
העבר את צלחת TLC לתא, תוך הימנעות ממגע עם נקודות היישום לדוגמה. השאירו את צלחת TLC בתא סגור עד שהממס מגיע לסנטימטר אחד לפני קצה הצלחת. בשלב זה, להסיר את הצלחת ולתת לו להתייבש.
כדי לזהות נוכחות של רמנוליפידים, רססו תמיסת אלפא נפתול על הצלחת במכסה המנוע, ואז הניחו צלחת מרוססת בתנור בטמפרטורה של 85 מעלות צלזיוס למשך מספר דקות עד שהסימן הוורדרד של השומנים הרמנוליפידים גלוי. כל שלושת הזנים pseudomonas aeruginosa מייצרים כמויות שונות של מונו ודי-רמנוליפידים.
