התחל בביצוע בדיקת MM QPCR למדידת אורך הטלומרים. לאחר מכן פתח את התוכנה ובחר את תכונת הגדרת הצלחת. לאחר מכן, בחר באפשרות להציג או לערוך צלחת מהתפריט הנפתח.
עכשיו להדגיש את כל הבארות על הצלחת. לחץ על בחר floraphores. סמן את התיבה שכותרתה סייבר, וודא שכל התיבות האחרות אינן מסומנות.
לאחר מכן לחץ על אישור כדי לאשר. תוך שמירה על הדגש על כל הבארות, אתרו ובדקו את התיבה שליד סייבר, הסמוכה למילה עומס כדי לתייג את כל הבארות בסייבר. כעת הדגש את שלוש בארות הבקרה שאינן תבניות הממוקמות בחלק העליון או התחתון של הדילול הטורי הסטנדרטי של הבקרה.
לאחר מכן, מתפריט סוג הדגימה מימין, בחר NTC. סמן את 21 הבארות המרכיבות את הדילול הטורי הסטנדרטי של הבקרה, ובחר תקן מתפריט סוג הדגימה. בעוד בארות אלה עדיין נבחרו, לחץ על שכפול טכני, בתפריט גודל שכפול, בחר שלוש.
לאחר מכן בחר אופקי ולחץ על החל. לאחר מכן, גלול מטה לקטע סדרת דילול והזן שניים בשדה גורם דילול. עבור לוח P1, הזן פעמיים 10 בחזקת שלוש שליליות בשדה הריכוז ההתחלתי.
לאחר מכן בחר את התיבה להפחתה ולחץ על החל כדי לאשר את ההגדרות. עבור לוח P2, הזן 3.13 כפול 10 בחזקת חמש שלילי בשדה הריכוז ההתחלתי. הקפד לסמן את התיבה להגדלה ולאחר מכן בחר החל כדי לסיים את ההגדרה.
כעת הדגש את העמודות המתאימות לרצועת PCR A מתפריט סוג המדגם, בחר לא ידוע ולאחר מכן המשך לבחור שכפול טכני. בתפריט הגודל המשוכפל, בחר שלושה ובחר אופקי לפני לחיצה על החל. לחץ על אישור בפינה השמאלית התחתונה של חלון עורך הצלחות.
אשר את השינויים על-ידי לחיצה על כן כאשר תתבקש לעשות זאת. לאחר מכן, ודא שהעקומות בכרטיסיית הכימות נראות מתאימות הן לשלב התשיעי והן לשלב 12, ושערכי היעילות בין שני שלבים אלה אינם סוטים ביותר מ- 10%עבור P1, בחר שלב תשע וסמן את 21 הבארות המתאימות לעקומה הסטנדרטית. העתק את ערכי CQ מהפינה השמאלית התחתונה של חלון התוכנה.
לאחר מכן פתח את תבנית גליון הנתונים של Telomere והדבק ערכים אלה בעמודה הסטנדרטית של גיליון אחד B.לאחר מכן, הזן את ערך השיפוע של שלב תשע לתא C ארבע בגיליון אחד סטנדרטי, בדוק שמקדם השונות עבור כל דילול משולש סטנדרטי נמוך מ- 0.1. ב- CFX, אל תכלול נקודות נתונים חריגות מהניתוח שגורמות לקבוצה של טריפליקטים ליפול מחוץ לטווח. כעת, אשרו כי רק 72 בארות הדגימה בקובץ הניתוח P1 מודגשות בכחול בכרטיסייה כימות.
לאחר מכן, בשלב תשע, העתק את ערכי CQ ו- SQ הנמצאים בפינה השמאלית התחתונה של חלון התוכנה והדבק אותם בגיליון P1 לדוגמה המתחיל בתא D3. באמצעות מאסטרו CFX, ודא שכל ערכי CQ עבור דגימות אנליטיות נמצאים בטווח של ערכי CQ הנמוכים והגבוהים ביותר של העקומה הסטנדרטית. בגיליון האקסל, ודא שהריכוז ההתחלתי ב- NTC הוא פחות מ -5% מהכמות הממוצעת של DNA בבארות הדגימה. לבקרת איכות ברמת המדגם, בדוק את סטיות התקן ומקדם הווריאציות בעמודות J ו- K בגיליונות הדגימות P1 ו- P2.
ודא שקורות החיים של המדגם הבודד בגיליון P1 לעומת P2, במיוחד בעמודה G, אינם עולים על 0.05. אם קורות החיים הבין-לוחית של מדגם גבוהים מהמקובל, הסר עד משולש אחד מהחישוב עבור כל דגימה. לבקרת איכות ברמת הצלחת, בדקו שהשונות הממוצעת בין לוחות בכל הדגימות בכל צלחת קטנה מ-0.05.
אם קורות החיים הבין-לוחית של מדגם גבוהים מהמקובל, הסר עד משולש אחד מהחישוב עבור כל דגימה. לבקרת איכות נוספת ברמת הצלחת, בדקו שהשונות הכוללת בין לוחות בגיליון P1 לעומת גיליון P2 קטנה מ-0.06.
