טרנספקציה של תאי HEK293T באמצעות מגיב טרנספקציה שומנים לא ליפוזומלי לייצור לנטיויראלי

כדי להתחיל, להוסיף את הרכיבים lentiviral בצינור 15 מיליליטר, ולהפוך את נפח ל 600 מיקרוליטר עם מאגר EC. מוסיפים 36 מיקרוליטר של תמיסת משפר, ובעזרת פיפטה של מיליליטר מערבבים שוב ושוב, מושכים ומשחררים חלק מהנוזל בחזרה לתמיסה. לאחר חמש דקות, להוסיף 120 מיקרוליטר של מגיב transfection ומערבבים כ 20 פעמים, כפי שהודגם קודם לכן.

השאירו את הצינור בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר מכן להוסיף 5.2 מיליליטר של cDMEM לצינור. בעזרת פיפטת העברה חד פעמית, מוסיפים את תערובת הטרנספקציה לתאי HEK293T החד-שכבתיים בתרבית בבקבוק T175.

מפזרים את הפלסמיד באופן שווה באמצעות תנועת נדנוד עדינה מצד לצד של הצלוחית. לדגור על התרבית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, ופחמן דו חמצני של 5% במשך 48 שעות. לאחר הדגירה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לאשר את transfection יעיל של תאים HEK293T על ידי התבוננות פלואורסצנטיות GFP.

עכשיו להטות את הצלוחית, ובאמצעות פס סרולוגי 25 מיליליטר, לאסוף את המדיום מבלי להפריע monolayer התא. מעבירים את המדיום לצינור 50 מיליליטר מסומן מראש וסוגרים את המכסה. מוסיפים 25 מיליליטר של cDMEM חם לאורך קירות הבקבוק מבלי להפריע למונולייה, ומחזירים את הבקבוק לאינקובטור.

לאחר 24 שעות, לאסוף את המדיום, להוסיף את תמיסת טיהור לתוך צלוחיות, ומניחים אותו אופקית במשך 24 השעות הבאות.