כדי להתחיל, להסיר את הבוכנה מזרק 50 מיליליטר, ולהכניס פוליאתרסולפון קושר חלבון נמוך או פוליווינילידן פלואוריד 0.45 מיקרומטר מסנן סטרילי לתוך קצה המזרק. באמצעות סטריפט סרולוגי של 25 מיליליטר, מוסיפים את הלנטיוירוס הנגוע HEK293T תרחיף התא לתוך המזרק ומחזירים בעדינות את הבוכנה. דוחפים את הבוכנה לאט ואוספים את התסנין בצינור חדש של 50 מיליליטר.
לאחר שתסיים, הסר את המסנן מהמזרק והשלך אותו בתמיסת הטיהור. הוסף שלושה מיליליטר של תמיסת 20% סוכרוז לתחתית צינור האולטרה-צנטריפוגה. לאחר מכן, הגדר את PIPETBOY למהירות הנמוכה ביותר.
החזיקו את צינור האולטרה-צנטריפוגה בזווית של כ-45 מעלות והוסיפו באיטיות את המדיום המסונן המכיל לנטיוירוס לדופן הצינור. שימו לב להפרדה ברורה של שכבות מהצינור. אם נפח הצינור הכולל קטן מ-29 מיליליטר, הוסף cDMEM טרי כדי למנוע קריסת הצינור במהלך הסיבוב.
נגבו את דלי האולטרה-צנטריפוגה ב-70% אלכוהול והניחו את מתאם הצינור בתחתית הדלי. לאחר מכן, הניחו את צינור האולטרה-צנטריפוגה לתוך הדלי. סגרו את הדלי והכניסו אותו למתלה.
מקררים מראש את האולטרה-צנטריפוגה לארבע מעלות צלזיוס. בזהירות מניחים את הדלי לתוך הרוטור ולהפעיל את השואב. התאם את קצב ההאצה וההאטה להגדרה הנמוכה ביותר ולצנטריפוגה ב -26, 000 סל"ד למשך 90 דקות בארבע מעלות צלזיוס.
לאחר הצנטריפוגה, לכבות את הוואקום בזהירות להסיר את הרוטור מבלי להפריע את הדגימות. שימו לב לאולטרה-צנטריפוגה כדי לוודא שאין נזילות ודליפות מהדליים. יוצקים את התוכן של צינור אולטרה-צנטריפוגה בתנועה חלקה אחת לתוך מיכל הפסולת.
הפכו את הצינור על נייר טישו דו-שכבתי למשך 10 דקות. בינתיים, נגבו את החלק הפנימי של הדלי עם נייר טישו ספוג אתנול 70% וייבשו אותו באוויר הפוך. בעזרת נייר טישו, יבשו בזהירות את שאריות הנוזל משפת צינור האולטרה-צנטריפוגה.
השהה מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של מדיה מתאימה ללא סרום ולהשאיר אותו למשך 15 דקות. באמצעות פיפטה של מיליליטר אחד, מערבבים בעדינות את תכשירי הלנטיוירוס ומוסיפים אותם לצינורות בורג של 1.5 מיליליטר. אחסנו את התכשירים הלנטי-ויראליים בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס.
הכנה מוצלחת של לנטיוירוס השיגה שיעור זיהום של מעל 95% במינון של חמישה מיקרוליטר. העוצמה הפלואורסצנטית הממוצעת של תאים נגועים עולה עם מינונים גבוהים יותר. הזרקה תוך צפקית של 100 מיקרוליטר של הכנת לנטיוירוס הניבה את האחוז והעוצמה הגבוהים ביותר של אות GFP בתאי הצפק בעכברים.
ניסויי מסלול זמן עם הזרקת 100 מיקרוליטר לנטיוירוס גילו אחוז משמעותי של תאים תושבים המבטאים GFP בימים השלישי והשביעי, ולאחר מכן היעלמות האוכלוסייה הנגועה ביום ה -14.
