לאחר איסוף צרורות גמטה מהרמפרודיטים וזרע ממיני אלמוגים גונוכוריים, הניחו אותם בצינורות מסומנים של 50 מיליליטר. הניחו ארבעה מיקרוליטרים של תרחיף זרע פעיל על תא ספירת מקלר. כדי להעריך את תנועתיות הזרע, הוסף ריכוז של הדגימה המופעלת.
פתח את קובץ גליון הנתונים האוטומטי של ביו-בנקאות אלמוגים והזן את גורם דילול הזרע המשמש להערכת ניתוח זרע בסיוע מחשב. לאחר מכן, הזן פלט ניתוח זרע בסיוע מחשב עבור ריכוז הזרע, תנועתיות כוללת ותנועתיות מתקדמת. כתוב את ריכוז הזרע על צינורית דגימת הזרע המסוננת והעבר את הצינורית לתחנת העבודה לשימור בהקפאה.
פתח את גליון הנתונים האוטומטי המשותף של ביו-בנקאות אלמוגים ובחר בכרטיסייה Cryopreservation. לאחר בדיקת תווית צינור דגימת הזרע, זהה את הערך המתאים על ידי בדיקת מזהה מושבה.באמצעות פיפטה סרולוגית, מדוד את נפח דגימת הזרע על ידי ציור והוצאתה חזרה לאותו צינור. הזן את הערך בעמודה E.בדוק את עמודה 1 המחושבת אוטומטית עבור ריכוז הקריופרוטקציה הנדרש ואת עמודה H עבור נפח הקריודילואינט שיש להוסיף.
הפעל טיימר. ובאמצעות פיפטה, dropwise להוסיף את DMSO cryodiluent עם ערבוב עדין קבוע של המדגם. רשום את זמן המהדורה הקריודלואנטית בעמודה P.Read עמודה K כדי לקבוע את מספר בקבוקוני ההקפאה שיש למלא.
פתחו את המכסה של בקבוקוני קריו סטריליים עם ברקוד, וסדרו את הפקקים על משטח סטרילי. באמצעות פיפטה סרולוגית ופיפטר aliquoting, aliquot מיליליטר אחד של דגימות לתוך בקבוקוני קריו ברקודד בקבוקוני סיכום. הניחו בקבוקון תרמי אחד ואת כל בקבוקוני הדגימה המלאים במתלה קריו ריק בטמפרטורת החדר.
לאחר מכן, הניחו את בקבוקוני הקריו הדמה המכילים 10% DMSO במי ים מסוננים בחריצים ריקים על מדף הקריו. הזן את מספר ההפעלה בעמודה U של גליון הנתונים האוטומטי וסרוק את המספר הסידורי של ארון ההדבקה לעמודה V.מקם את הסמן בתא הנכון של עמודה Z וסרוק את בקבוקון הזוג התרמי, ואחריו את כל צינורות בקבוקוני הקריו. הניחו בצד מתלים טעונים וסרוקים למשך שארית שיווי המשקל של ההגנה הקריופרוטקטיבית.
מלא את כלי הקירור של מתלה ההקפאה בחנקן נוזלי לרמה הדרושה לקירור בטמפרטורה של כ-20 מעלות צלזיוס לדקה. לאחר תקופת שיווי משקל של 10 דקות, חבר את הגשושית התרמו-זוגית לאוגר הנתונים והתחל להקליט. הניחו בעדינות את מתלה הקריו המלא בכלי הקירור והניחו את המכסה.
רשום את זמן ההתחלה בעמודה Q.ברגע שבקבוקון התרמוזוג מציין 80 מעלות צלזיוס או פחות באוגר הנתונים, העבר את מתלה ההקפאה שהוכנס לאמבט חנקן נוזלי כדי להרוות את הדגימות. הסר את בקבוקוני הקריו מהמדף והעבר אותם למשלוח יבש להובלה לביובנק. ב- Acropora millepora, שקופיות תא החלקה עם כיסוי קבוע הראו פחות ממחצית מספירת ריכוז הזרע בהשוואה לתא ספירת מקלר.
אימות תא הספירה של מקלר עם מיקרו-כדוריות לטקס זמינות מסחרית בריכוז ידוע הביא לספירות עקביות עם שונות נמוכה בטווח הצפוי. לא נצפה הבדל משמעותי בריכוזים שלאחר ההפשרה של זרע כולל, תנועתי או תנועתי בהדרגה בדגימות שנשמרו בהקפאה באמצעות 20% או 30% DMSO כחומר קריודילואנטי.
