אימונוסטיין של אורגנואידים שמקורם בסרטן המעי הגס בפפטיד הידרוג'ל

כדי להתחיל, פיפטה 20 מיקרוליטר טיפות של הידרוג'ל פפטיד לתוך צלחת 24 באר. זרעו 800 תאים מקו התאים SW1222 לכל באר במשך ארבעה ימים. ביום הרביעי, פיפטה החוצה את המדיום.

לשטוף כל באר פעמיים עם PBS. לאחר מכן, להוסיף 400 מיקרוליטר של תמיסת פורמלין 4% לתוך הבארות. לאחר השלמת הדגירה, השתמש בקצה פיפטה P1000 כדי לשאוף את תמיסת הפורמלדהיד.

לאחר מכן, לשטוף את הבארות עם PBS שוב. לדגור את התאים במיליליטר אחד של חיץ permeabilization במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הוצאת החיץ ושטיפת הבארות עם PBS, הוסף 0.5 מיליליטר של חיץ חוסם.

כעת, שטפו את הבארות עם PBS לאחר הסרת חיץ החסימה. לאחר מכן, פיפטה 200 מיקרוליטר של נוגדן ראשוני מדולל לתוך הבארות. דוגרים על הצלחת למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס.

עם קצה פיפטה P200, הסר את התמיסה. לאחר מכן, לשטוף את הבארות עם פתרון PBS. לאחר מכן, להוסיף phalloidin מצומד בקבוקון של נוגדן משני מדולל ביחס של אחד עד 40.

פיפטה תערובת זו לתוך בארות הצלחת. לאחר מכן, לדגור על הצלחת בטמפרטורת החדר במשך שלוש שעות בחושך. לאחר שאיפת התמיסה ושטיפת הבארות עם PBS, פיפטה 300 מיקרוליטר של תמיסת DAPI לכל באר.

לאחר הדגירה, לשטוף את הבארות עם PBS שוב לאחר pipetout את התמיסה. אחסנו את הצלחת בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך עד שבעה ימים. Immunostaining הראה כי האורגנואידים שנמצאו בפפטיד P שאינו ביו-פונקציונלי, בפפטיד P1 הביו-פונקציונלי ובמטריג'ל נמצאו ממוקמים בקרומים האפיקליים והבזולטרליים.

הפפטיד P הלא ביו-פונקציונלי גרם לביטוי צומת תא-תא בקרום הבזולטרלי.