כדי להתחיל, ארוז את עמודת FPLC והכן את לולאת הדגימה לטעינת דגימה. עכשיו ללכת לתוכנה. לחץ פעמיים על הגדרות המשאבה ובחר לולאת עומס ידנית.
כעת חבר את הצינור מיציאת העמוד לצינורות על גבי מתאם הזרימה. שחררו את הברגת הצינור מלולאה E והכניסו אותו למיכל הפסולת. לאחר מכן באמצעות מזרק 30 מיליליטר, לצייר את הדגימה לצרף את המזרק למתאם יציאת ההזרקה.
הבריגו את המזרק לתוך פתח ההזרקה והזריקו את הדגימה, כדי לוודא שהיא מוזרקת באופן גלוי לתוך לולאת הדגימה. כעת חבר את יציאת ההזרקה עם מכסה העמודה. חבר את הצינור מתחתית לולאת הדגימה ליציאת לולאה E.
לאחר מכן הניחו את הצינור ממשאבה B לתוך חיץ האלוציה. נווט אל הכרטיסיה בית ובחר שיטה חדשה. לאחר מכן, בחר את הגדרות שיטה הכרטיסייה בעמודה השמאלית.
עבור אל התפריט הנפתח סוג עמודה ובחר מותאם אישית. הזן את נפח העמודה כחמישה מיליליטר ואת קצב הזרימה הנדרש להפעלה כמיליליטר אחד לדקה. נווט אל בחירת יחידה ובחר CV, אמצעי אחסון של עמודות, כיחידת הבסיס של השיטה.
ודא שכניסה A מוגדרת למאגר A1 וכניסה B למאגר B1. לאחר מכן בחר בכרטיסייה Method Outline בתפריט השמאלי. תחת איזון, הגדר את אמצעי האחסון של שיווי משקל ל- 10 CV.תחת הכרטיסיה יישום לדוגמה, הגדר את אמצעי האחסון של הדגימה על-ידי צפייה בלולאה של הדגימה. נווט אל Column Wash והגדר את נפח הכביסה לחמישה CV.For Elution, הגדר את נפח השיפוע ל- 14 CV, החל מ- 0%buffer B ל- 100%buffer B.שמור את השיטה והתחל את ההפעלה.
ודא שאספן השברים מתחיל במיקום של השבר הראשון. הזן את שם ההפעלה ולחץ על התחל. במהלך יישום הדגימה, החליפו את הצינורות הנכנסים כעת למיכל הפסולת למיכל נקי.
אספו את החלבונים הבלתי קשורים הזורמים החוצה מצינורות אלה כזרימה דרכם ותייגו אותם כ-FT. לאחר השלמת ההפעלה, נווט אל הכרטיסיה בית ובחר פתח הפעלה. פתח את הריצה כדי להציג את הכרומטוגרמה. בחר שילוב שיא בתפריט העליון כדי לסמן את הפסגות שהתקבלו.
בחר בכרטיסיה שברים כדי להציג באופן חזותי את השברים המכילים חלבון מלוטש.
